[发明专利]一种油菜转基因成分的检测方法

摘要

本发明公开了一种油菜转基因成分的检测方法，包括以下步骤：确定转基因成分、内源标准基因和外源标准基因；制备多重扩增引物；进行抽样并混合，得到混合样品；提取混合样品的基因组并加入外源标准基因，得到混合核酸；构建高通量测序文库；对高通量测序文库进行高通量测序，得到测序片段组；获得待测样品中转基因成分的测序片段的数量；待检样品DNA在引物、Bst DNA聚合酶存在的条件下进行恒温扩增反应；根据外源标准基因的测序片段的数量，判断实验是否成功并计算待测样品种中转基因成分的含量；根据转基因成分的含量判断待测样品中是否含有转基因成分。本发明能够同时定量检测待测样品中的任意多种转基因成分。

主权项

1.一种油菜转基因成分的检测方法，其特征在于,包括以下步骤：S1、确定待测样品中需要检测的转基因成分、所述待测样品中的内源标准基因和所述待测样品的外源标准基因，所述待测样品为油菜植株或所述油菜植株的一部分；S2、制备用于扩增所述转基因成分、所述内源标准基因和所述外源标准基因的测试区域的多重扩增引物；S3、对所述待测样品进行抽样并混合，得到混合样品；S4、提取所述混合样品的基因组；S5、向所述混合样品的基因组中加入所述外源标准基因，得到混合核酸；S6、利用所述多重扩增引物对所述混合核酸进行扩增，得到扩增产物，利用所述扩增产物构建高通量测序文库；S7、对所述高通量测序文库进行高通量测序，得到测序片段组；S8、分析所述测序片段组，获得所述待测样品中所述转基因成分的测序片段的数量、所述内源标准基因的测序片段的数量和所述外源标准基因的测序片段的数量；S9、待检样品DNA在引物、Bst DNA聚合酶存在的条件下进行恒温扩增反应；S10、结合所述外源标准基因的测序片段的数量以及根据扩增结果判断待检样品中是否存在转基因成分，判断实验是否成功；S11、若所述实验成功，则计算所述待测样品种中所述转基因成分的含量；S12、根据所述转基因成分的含量判断所述待测样品中是否含有转基因成分。