[发明专利]一种可直接用于高通量测序的植物细胞器DNA提取方法

摘要

本发明公开了一种可直接用于高通量测序的植物细胞器DNA提取方法。首先配置GM1（含BSA，PVP，β‑巯基乙醇），GM2（含BSA，β‑巯基乙醇），GM3（含BSA）；然后将将新鲜植物材料进行预处理后，加入GM1研磨缓冲液，研磨过滤后收集滤液，对滤液进行离心，得到线粒体与叶绿体的粗提物；加入GM2进行悬浮后，清洗，离心得到较纯的线粒体与叶绿体；加入GM3悬浮后，加入DNaseⅠ降解核DNA，离心后收集线粒体与叶绿体，使用试剂盒提取细胞器DNA。本发明能够快速获得可以用于二代或三代测序的植物细胞器DNA。

主权项

1.一种可直接用于高通量测序的植物细胞器DNA提取方法，其特征是，具体包括下述步骤，下述（3）‑（6）均在4℃进行操作：（1）缓冲液配置：GM1缓冲液：0.5 M蔗糖，0.001M EDTA，0.1M KH2PO4，1% BSA，0.5%PVP，1%β‑巯基乙醇，pH 7.5；GM2缓冲液：0.5 M蔗糖，0.001M EDTA，0.1M KH2PO4，1% BSA，1%β‑巯基乙醇，pH 7.5；GM3缓冲液：0.5 M蔗糖，0.001M EDTA，0.1M KH2PO4，1% BSA，pH 7.5；（2）材料预处理：取新鲜植物材料清洗后在4℃预冷1h；（3）破碎细胞：将步骤（2）中的材料放置于粉碎机中，加入步骤（1）中的GM1，打磨2min；8层纱布过滤，获得上清液；（4）分离细胞器：将步骤（3）中获得的上清液，1 800g 离心5min，取上清；2 000g 离心5min，取上清；4 000g 离心10min，取上清；18 000g 离心20min，收集沉淀；（5）纯化细胞器：将步骤（4）中获得的沉淀，加入步骤（3）中的GM2，悬浮沉淀后，2 000g 离心5min，取上清；4 000g 离心10min，取上清；18 000g 离心20min，收集沉淀；（6）降解核DNA：将步骤（5）中获得的沉淀加入步骤（1）中的GM3悬浮后，加入DNaseⅠ，置于冰上2h后，18 000g 离心20min，收集沉淀；（7）提取细胞器DNA：利用试剂盒提取细胞器DNA。