[发明专利]花豇豆酯酶的提取方法及其在有机磷农药残留检测中的应用在审
| 申请号： | 201810448436.5 | 申请日： | 2018-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN108823181A | 公开（公告）日： | 2018-11-16 |
| 发明（设计）人： | 谢海伟;黄彩景;罗沛如;易婷 | 申请（专利权）人： | 惠州学院 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12Q1/44 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 邓聪权 |
| 地址： | 516007 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明采用粉碎离心的方法从花豇豆中提取花豇豆酯酶，并通过浓度不同的硫酸铵溶液盐析后用乙醇沉淀的纯化工艺对花豇豆酯酶粗液进行纯化，根据酶抑制法原理，利用花豇豆酯酶水解底物α‑乙酸萘酯生成乙酸和α‑萘酚，α‑萘酚与固蓝B盐作用生成紫红色的偶氮化合物。通过制作速测卡来检测农药对酶活性的影响，当花豇豆酯酶受到有机磷农药抑制后，会影响显色反应，因此，根据产生的显色反应强弱指示农药残留情况。 | ||
| 搜索关键词： | 豇豆 酯酶 显色反应 萘酚 有机磷农药残留检测 乙酸 硫酸铵溶液 偶氮化合物 有机磷农药 酶抑制法 农药残留 乙醇沉淀 乙酸萘酯 酯酶水解 酶活性 速测卡 紫红色 粗液 底物 对花 盐析 强弱 农药 检测 制作 应用 | ||
【主权项】：
1.一种花豇豆酶的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、粉碎：用电子天平称取20克花豇豆，用粉碎机粉碎，过100目筛，置于烧杯；(2)、混合：向烧杯加入120mL 0.1mol/L，pH 6.5磷酸盐缓冲液,振荡或搅碎10～30min；(3)、静置、过滤：在4℃冰箱中浸泡过夜、用4层纱布过滤；(4)、离心：于4℃条件下，10000r/min冷冻离心10min收集上层清液，即为粗酶液；(5、)纯化：a、从粗酯酶中取10mL，并加入硫酸铵至25％的饱和度，放在4℃的冰箱中静置12h后；b、取静置液于离心管中，在4℃条件下,10000r/min冷冻离心10min，弃去沉淀，取上清液；c、向上清液加入至硫酸铵60％饱和度,离心，收集下层沉淀，即为纯化后的花豇豆酯酶。
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