[发明专利]一种山楂黄酮类成分UPLC指纹图谱的构建方法

摘要

本发明提供了一种山楂黄酮类成分UPLC指纹图谱的构建方法：将山楂提取液过大孔树脂和聚酰胺树脂柱，获得供试品溶液；以儿茶素，表儿茶素，牡荆素鼠李糖苷，金丝桃苷，异槲皮苷，槲皮素为对照品；测定10批以上山楂并进行分析比较，得到由23个共有特征峰构成的山楂黄酮类成分UPLC指纹图谱。本发明通过大孔树脂和聚酰胺联用的方式对山楂提取液进行纯化和富集，解决了山楂中黄酮类有效成分含量较低，干扰大的问题；构建指纹图谱的方法精密度、重现性及稳定性均良好；用时仅有17分钟，可行性强；通过指纹图谱中共有峰的有无和指纹特征，可全面地对山楂饮片的质量进行评价，保证药材质量的稳定性及临床用药有有效性与安全性。

主权项

1.一种山楂黄酮类成分UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取HP‑20型大孔树脂和100‑200目聚酰胺树脂，加95%乙醇冲洗干净，备用；取直径为2cm的玻璃色谱柱，加聚酰胺3cm高，待聚酰胺沉降完全后，加HP‑20型大孔树脂8cm高，用水冲至无乙醇味，得到玻璃色谱柱；（2）称取山楂药材或饮片的粉末约2g，精密加入甲醇30mL，超声处理20‑40min，滤过，滤液减压蒸干，残渣加水20mL温热超声溶解，放冷，获得山楂提取液；（3）将步骤（1）中制备的山楂提取液缓缓加至步骤（1）的玻璃色谱柱上，加水40‑60mL洗脱，之后再加20%乙醇40‑60mL洗脱，两种洗脱液弃去；继续以70%乙醇100mL洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣用乙醇或甲醇溶解，转移至5mL容量瓶中，定容，作为供试品溶液；（4）分别精确称取儿茶素，表儿茶素，牡荆素鼠李糖苷，金丝桃苷，异槲皮苷，槲皮素对照品，加甲醇溶解，制成对照品储备液，再分别吸取一定体积的对照品储备液，混合为浓度分别约为100μg/mL、100μg/mL、25μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、10μg/mL的混合对照品溶液；（5）精密吸取对照品溶液或供试品溶液2μL注入超高效液相色谱仪；色谱条件：色谱柱：waters T3色谱柱，填料粒径1.7μm，柱长100mm，柱内径2.1mm；流动相：以乙腈（A）‑0.3%磷酸水溶液（B）为流动相，采用以下梯度条件，进行梯度洗脱：从0‑4mim，流动相A的体积百分含量由10%提高至15%，流动相B的体积百分含量由90%降低至85%；从4‑9.5mim，流动相A的体积百分含量由15%提高至17%，流动相B的体积百分含量由85%降低至83%；从9.5‑11mim，流动相A的体积百分含量由17%提高至25%，流动相B的体积百分含量由83%降低至75%；从11‑17mim，流动相A的体积百分含量由25%提高至50%，流动相B的体积百分含量由75%降低至50%；检测波长355nm，柱温：30℃，流速：0.4mL/min；（6）测定10批以上山楂药材或饮片并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的山楂黄酮类成分UPLC指纹图谱。