[发明专利]一种从人体血液中性粒细胞的嗜天青颗粒中分离纯化天然蛋白酶3的方法有效
| 申请号： | 201810454057.7 | 申请日： | 2018-05-14 |
| 公开（公告）号： | CN108611343B | 公开（公告）日： | 2021-04-13 |
| 发明（设计）人： | 孙鹏;康雅明 | 申请（专利权）人： | 武汉博百欧生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 廉海涛 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种从人体血液中性粒细胞的嗜天青颗粒中分离纯化天然蛋白酶3的方法，步骤包括：使用从人体输血后废弃医疗用品中回收并提取的中性粒细胞嗜天青颗粒,经研磨，溶解，离心后获得含有蛋白酶3的层析过柱起始蛋白溶液，结合阳离子交换层析柱，染色配体层析柱，分子筛层析柱以及亲和层析柱等纯化方法从人体血液中性粒细胞嗜天青颗粒中分离、纯化天然蛋白酶3。采用上述方法制备得到的天然蛋白酶3在产量、纯度、活性、特异性以及稳定性上均有大幅度的提高，其高质量更适用于科学研究以及医学检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 人体 血液 中性 粒细胞 天青 颗粒 分离 纯化 天然 蛋白酶 方法 | ||
【主权项】：
1.一种从人体血液中性粒细胞的嗜天青颗粒中分离纯化天然蛋白酶3的方法，其特征在于：步骤包括：S1、研磨、溶解：将嗜天青颗粒细胞组织研磨均匀，高速离心去除不溶解杂质获得过柱起始蛋白溶液；S2、阳离子交换层析：将起始蛋白溶液负载于阳离子交换柱层析柱中，使用梯度盐度层析洗脱方式进行洗脱，得到初级纯化蛋白样品；S3、染色配体层析：将初级纯化蛋白样品再通过染色配体层析柱进一步洗脱去除杂质，得到二级纯化蛋白溶液；S4、分子筛层析：将二级纯化蛋白溶液通过分子筛层析柱进一步洗脱分离蛋白酶3抗原，分馏收集洗脱液得到三级纯化蛋白溶液；S5、亲和层析：经过亲和层析柱将三级纯化蛋白溶液中的杂蛋白进一步洗脱剔除，得到最终成品。
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