[发明专利]一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法

摘要

本发明涉及人工髓核制备领域，具体为一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法，该载富勒烯人工髓核配方的制备方法，采用半成型的设计思路，可通过较小的侵入性植入患处，降低手术风险和术后移位的问题；将富勒烯加入人工髓核内，可降低髓核内自由基含量，达到减缓椎间盘退化的目的。将人工髓核设计成内层为干凝胶且外层为静电纺丝膜的结构，一方面可以利用外层的三维网状纤维膜可将内层的干凝胶包裹住，又不影响干凝胶的水化、膨胀又能起到防止凝胶移位，降低溢出的风险；另一方面能根据实际需要调节填充干凝胶的质量和纤维膜的直径，达到更好的填充的效果，更好的恢复椎间盘结构，且产品为干燥固体，易于保存，保存期长。

主权项

1.一种载富勒烯人工髓核配方的制备方法，其特征在于：该载富勒烯人工髓核配方的制备方法包括以下步骤：S1、壳聚糖/Ⅱ型胶原蛋白/β‑甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶的制备：一、壳聚糖溶液的配制：1、材料的选取：使用50mL的广口烧杯进行若干浓度为0.IM的稀醋酸的量取以及使用天平进行一定量的脱乙酰度大于90％的壳聚糖粉末的称取；2、材料的混合：使用磁力搅拌机对烧杯内部量取的若干稀醋酸进行搅拌，并且将称取的壳聚糖粉末依次加入烧杯内部与其内部的稀醋酸进行混合，直至壳聚糖溶液的浓度为10‑20wt％后，停止搅拌混合步骤；3、材料的消毒：将混合完成后的壳聚糖溶液置于高温高压灭菌锅的内部进行消毒；4、材料的存储：待消毒完成后，将壳聚糖溶液静置冷却，待冷却至室温后，将冷却至室温的壳聚糖溶液放入冰箱内进行存储，等待下一步骤；二、Ⅱ型胶原溶液的配制：1、材料的选取：配置一定量浓度为0.02M的稀醋酸以及量取一定量的无菌Ⅱ型胶原；2、材料的消毒：使用滤膜将配置好的稀醋酸溶液进行过滤消毒，；3、材料的混合：将无菌Ⅱ型胶原依次加入配置好的稀醋酸溶液内，同时进行缓慢搅拌混合，二者溶解混合成为Ⅱ型胶原溶液，待混合后的溶液胶原浓度为2.5‑5mg/mL后，停止搅拌；其中Ⅱ型胶原溶液的配制中的1‑3步骤均在超净台中进行；4、材料的存储：将搅拌混合所得到的胶原浓度为2.5‑5mg/mL的Ⅱ型胶原溶液进行封口后，放置在冰箱内部进行存储，等待下一步骤；三、β‑甘油磷酸钠溶液的配制：1、材料的选取：选取一定量的β‑甘油磷酸钠粉末，将其逐步加入到超纯水中进行溶解，直至β‑甘油磷酸钠溶液的浓度为50wt％即可；2、材料的消毒：使用滤膜对溶解获得的浓度为50wt％的β‑甘油磷酸钠溶液进行过滤消毒；3、材料的存储：将过滤消毒后的浓度为50wt％的β‑甘油磷酸钠溶液放置于恒温冰箱内部，进行存储，等待下一步骤；四、富勒烯/羟乙基纤维素溶液的配置：1、材料的选取：选取适量的羟乙基纤维素、不同浓度的富勒烯分子以及PBS溶液；2、材料的混合：将羟乙基纤维素逐步加入至PBS溶液内部进行溶解混合，通过二者的溶解混合形成羟乙基纤维素溶液，直至羟乙基纤维素溶液的浓度为10‑50mg/mL即可；3、材料的消毒：使用滤膜对羟乙基纤维素溶液进行的过滤消毒；4、材料的二次混合：将多份不同浓度的富勒烯分子依次加入至浓度为10‑50mg/mL的羟乙基纤维素溶液中进行二次混合；5、材料的存储：将二次混合后获得的富勒烯/羟乙基纤维素溶液放置在恒温冰箱内进行存储，等待下一步骤；五、壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液的配置：1、材料的混合：将步骤一中配置好的无菌壳聚糖溶液与步骤二中配置好的Ⅱ型胶原溶液按照2:1的体积比例加入无菌烧杯中，然后将烧杯置于冰上，进行无菌壳聚糖溶液以及Ⅱ型胶原溶液的搅拌混合，其中搅拌混合时长为10分钟；2、材料的存储：将搅拌混合后的壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液进行封口，然后放置在冰箱内部进行存储，等待下一步骤；六、壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液、β‑甘油磷酸钠溶液以及富勒烯/羟乙基纤维素溶液的混合：1、材料的混合：将步骤五中的壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液、步骤三中的β‑甘油磷酸钠溶液以及步骤四中的富勒烯/羟乙基纤维素溶液置于超净台内部，其中壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液置于冰上进行搅拌，然后将配置好的浓度为50wt％的无菌β‑甘油磷酸钠溶液逐步缓慢加入至壳聚糖/Ⅱ型胶原溶液内，进行混合，获得浓度为4‑15wt％的壳聚糖/Ⅱ型胶原/β‑甘油磷酸钠溶液，然后将富勒烯/羟乙基纤维素溶液加入至壳聚糖/Ⅱ型胶原/β‑甘油磷酸钠溶液的内部进行混合，将壳聚糖/Ⅱ型胶原/β‑甘油磷酸钠/富勒烯/羟乙基纤维素的混合溶液置于温度为37℃的恒温水浴锅内，进行溶液的升温，待混合溶液呈凝胶状态后，置于冰箱内部进行冷冻干燥，从而获得富勒烯/壳聚糖/胶原蛋白/β‑甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶，其中冰箱的温度为‑80℃，冷冻干燥时长为4小时。S2、富勒烯聚氨酯静电纺丝膜的制备：一、膜的成型：1、材料的选取：量取适量的聚氨酯、六氟异丙醇溶剂以及富勒烯，其中富勒烯的重量为聚氨酯重量的1～10％；2、材料的混合：将聚氨酯加入至六氟异丙醇溶剂内进行溶解混合，形成重量百分比为10～20％的溶液，然后将重量为聚氨酯重量的1～10％的富勒烯加入至混合溶液内，进行二次混合；3、材料的成膜：将二次混合后的富勒烯/聚氨酯/六氟异丙醇溶剂注入至静电纺丝装置内，进行静电纺丝，从而获得聚氨酯纳米纤维膜，其中静电纺丝装置的电压为20～30kV、喷丝头溶液流量为0.1～10mL/h及接收距离为10～20cm，其中聚氨酯纳米纤维膜的纤维直径为100～500nm；4、材料的成型：将静电纺丝后的聚氨酯纳米纤维膜进行冷冻干燥成型及真空干燥；二、静电纺丝的过程：1、溶液的注入：将步骤一中的富勒烯/聚氨酯/六氟异丙醇溶剂置于注射器的内部，且通过其推进器进行推动，直至液滴稳定流下后，调高推进器电压；2、成型丝膜的接收：使用滚轴进行聚氨酯纳米纤维膜的接收，通过滚轴滚动进行纺丝过程中的聚氨酯纳米纤维膜的持续接收，从而形成完整的聚氨酯纳米纤维膜，其中滚轴为不锈钢材质构成。S3、载富勒烯人工髓核的制备：一、内层的处理：将S1步骤中最终获得的富勒烯/壳聚糖/胶原蛋白/β‑甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶切成若干小块；二、外层的处理：将S2中的聚氨酯纳米纤维膜呈上下双层设置，其中二者之间留有间隔；三、载富勒烯人工髓核的成型：将步骤一中的若干小块的富勒烯/壳聚糖/胶原蛋白/β‑甘油磷酸钠/羟乙基纤维素干凝胶放置在步骤二中的双层聚氨酯纳米纤维膜之间的间隔，并通过热压装置将双层的聚氨酯纳米纤维膜的边缘处进行密封，从而形成人工髓核。