[发明专利]一种用于木薯固氮的柠檬色短小杆菌的制备方法

摘要

本发明公开了用于木薯固氮的柠檬色短小杆菌的制备方法，其保藏编号为：CGMCC No.12181。以该柠檬色短小杆菌为活性成分的生物菌剂，将其经管种培养、液体发酵培养后制成的生物菌剂。应用该菌种及其生物菌剂在木薯生长的苗期可以显著提高木薯根、茎、叶的含氮量，有助于木薯生长前期的氮素积累，在木薯的生产上具有较好的应用价值。

主权项

1.一种用于木薯固氮的柠檬色短小杆菌的制备方法，其特征在于，所述一种用于木薯固氮的柠檬色短小杆菌为放线菌门Actinobacteria，短小杆菌属Curtobacterium，柠檬色短小杆菌Curtobacterium citreum，保藏编号为：CGMCC No.12181，步骤为：步骤一、样品选取：对木薯进行采样，选取木薯的根部未膨大的部分，选取一定长度的完整根部，直径为2‑3mm；步骤二、将采集的木薯根部按照根长分类，大致分为4类分别为5cm，10cm，15cm，20cm，用蒸馏水冲洗干净；将分类好的木薯根进行表面杀菌，将表面杀菌完成的木薯根用无菌水冲洗5遍，将最后一遍冲洗的无菌水涂布在LB培养基上，37℃培养36h，将没有菌体长出的材料用于内生菌的筛选；步骤三、将步骤二处理后消毒并冲洗干净的根放入研钵中研磨，加入10mL的无菌水后静置5min，取0.1mL的研磨液涂布在无氮固体培养基上，28℃培养5‑7d；观察无氮固体培养基上的细菌生长状况，选取能够生长的并能够挑起的单个菌落进行划线培养；在无氮固体培养基上进行划线培养，传代三次后选取能够传代培养，并且可以划线分离的细菌进行后续试验；步骤四、对所得内生固氮菌株进行总DNA提取，并以总DNA为模板，扩增16S rRNA基因序列，扩增产物测序后，结果在NCBI上进行比对。