[发明专利]一种用于检测人类PAX1基因甲基化突变的多重荧光PCR检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种用于检测人类PAX1基因甲基化突变的多重荧光PCR检测试剂盒，包括一第一检测引物对、一第一检测探针、一第二检测引物对和一第二检测探针；第一检测探针的5’端修饰有第一荧光报告基团，3’端修饰有第一荧光猝灭基团；第二检测探针的5’端修饰有与第一荧光报告基团不同的第二荧光报告基团，3’端修饰有第二荧光猝灭基团。本发明以人类PAX1基因甲基化突变为检测对象，通过特异引物的优化组合以及荧光探针，从而实现准确、简单、快速地测PAX1基因甲基化突变，且对于来自甲醛固定石蜡包埋的样品所获得的短片段DNA依然具有与新鲜组织样品DNA同样的扩增和检测能力。

主权项

1.一种用于检测人类PAX1基因甲基化突变的多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括一第一检测引物对、一第一检测探针、一第二检测引物对和一第二检测探针；第一检测探针的5’端修饰有第一荧光报告基团，3’端修饰有第一荧光猝灭基团；第二检测探针的5’端修饰有与第一荧光报告基团不同的第二荧光报告基团，3’端修饰有第二荧光猝灭基团；其中第一检测引物对由PAX1‑F和PAX1‑R组成，依次包括如SEQ ID NO 01和02所示的序列；第一检测探针为PAX1‑P，包括如SEQ ID NO 03所示的序列；第二检测引物对由ACTB‑F和ACTB‑R组成，依次包括如SEQ ID NO 04和05所示的序列；第二检测探针为ACTB‑P，包括如SEQ ID NO 06所示的序列；该多重荧光PCR检测试剂盒的反应体系的组成如下：第一检测引物对、第二检测引物对、第一检测探针、第二检测探针、1×PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、Taq酶、模板和H2O；上述模板的DNA甲基化位点通过亚硫酸盐处理液进行了转化；该多重荧光PCR检测试剂盒的反应体系的反应条件均为：95℃预变性5min，1个循环；95℃变性25s，56℃退火20s，72℃延伸15s，15个循环；95℃变性25s，56℃退火35s，72℃延伸10s，30个循环；后30个循环在退火时检测荧光信号。