[发明专利]基于双发射荧光探针的碱性磷酸酶及砷酸根检测方法

摘要

本发明公开了一种基于双发射荧光探针的碱性磷酸酶及砷酸根检测方法，属于环境分析技术领域。制备双发射荧光探针luminol‑Tb‑GMP，当存在碱性磷酸酶(ALP)时，ALP特异性剪切GMP中的磷酸基团，破坏了luminol‑Tb‑GMP的结构，使得Tb3+的荧光猝灭，溶液中的luminol与Tb3+发生再配位而生成luminol‑Tb，使得luminol的荧光增强，建立基于Tb3+与luminol荧光信号比率的ALP检测方法。此外，随着ALP浓度的增加，Tb3+的绿色荧光减弱，而luminol的蓝色荧光增强，据此还可实现对ALP的可视化检测。进而，由于砷酸根(As(V))对ALP的强抑制作用，当存在As(V)时，ALP的活性下降，ALP对GMP的剪切作用减弱，使得Tb3+荧光信号增强而luminol荧光信号减弱，建立基于As(V)对ALP抑制作用的As(V)检测方法。本发明方法还可应用于环境水样中ALP和As(V)的灵敏检测。

主权项

1.基于双发射荧光探针的碱性磷酸酶检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将40μL 10mM鲁米诺溶液与100μL 100mM单磷酸鸟苷溶液混合，搅拌30分钟，再加入100μL 100mM的Tb(NO3)3·6H2O溶液，搅拌反应30分钟，得到乳白色絮状沉淀，将沉淀分散于1mL超纯水中，制成双发射荧光探针溶液；(2)将10μL双发射荧光探针溶液和40μL 10mM Tris‑HCl缓冲溶液与不同浓度的碱性磷酸酶溶液混合，用超纯水稀释溶液的总体积为200μL，在37℃孵育60分钟，采用荧光光谱仪测量稀释后溶液中Tb3+和鲁米诺的荧光强度，根据不同浓度下的碱性磷酸酶对应的Tb3+荧光信号与鲁米诺荧光信号之间的比值的线性关系来判断碱性磷酸酶的活性；或在波长为253.7nm的紫外灯照射下，观察稀释后溶液颜色的变化来实现对碱性磷酸酶活性的快速可视化分析。