[发明专利]一种榆中贝母微繁的方法

摘要

本发明提供了一种榆中贝母微繁的方法，主要包括如下步骤：（1）选择新鲜榆中贝母鳞茎的鳞片作为外植体；（2）对外植体进行冲洗和消毒处理；（3）将鳞片切块后接种于MS+0.5～2.0mg/L 6‑BA+0.5～2.0mg/LNAA的培养基中培养42～48d，得到分化出小苗的小鳞茎；（4）将小鳞茎接种于MS+1.5～2.5mg/L 6‑BA+0.2～0.5mg/LNAA的培养基继代培养42～48d；（5）将无菌小苗接种于1/2MS+0.1～0.5mg/LNAA的培养基中生根培养42～48d；（6）洗苗；（7）炼苗；（8）打破休眠。本发明以榆中贝母鳞茎作为外植体材料，通过组织培养技术，筛选出了适宜榆中贝母各个培养时期的激素组合及生长条件，为榆中贝母工厂化生产和良种繁育提供了有效途径，有效解决了榆中贝母用药紧张和资源逐渐枯竭的问题。

主权项

1.一种榆中贝母微繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）外植体的选择：选择无病株生长3年的新鲜榆中贝母鳞茎，把腐烂、褐化的鳞片剪掉，然后剥下新鲜完好的鳞片；（2）外植体的消毒：将新鲜鳞片进行冲洗和消毒处理；（3）接种：将消毒后的鳞片在超净工作台上切成小块，接种于 MS+0.5～2.0 mg/L 6‑BA +0.5～2.0 mg/L NAA的培养基中，置于培养温度10～25℃、光照强度1000～1500 Lx 的条件下培养42～48 d，得到分化出小苗的小鳞茎；（4）继代培养：从步骤（3）培养得到的小鳞茎中选取生长健壮的小苗，并将小鳞茎边缘老化、生长不好的不定芽去掉，接种于MS+1.5～2.5mg/L 6‑BA+0.2～0.5 mg/L NAA的培养基，置于培养温度10～25℃、光照强度1000 ～1500 Lx 的条件下继代培养42～48 d；（5）生根培养：将步骤（4）中生长一致、健壮的无菌小苗接种于 1/2MS+0.1～0.5 mg/L NAA 的培养基中，置于培养温度10～25℃、光照强度1000～1500 Lx 的条件下进行生根培养42～48 d；（6）洗苗：取出步骤（5）培养得到的生根苗即生根的小鳞茎，放入清水盆中冲洗干净，并进行消毒处理；（7）炼苗：将步骤（6）中消毒好的生根苗用100 mg/L外源赤霉素浸泡 20～40min，取出晾干，之后放入包装箱；放入前事先在包装箱底部铺一层塑料，然后放入灭过菌的蛭石，再将生根苗置于蛭石上，生根苗分层放置，然后将包装箱底部的塑料的四边翻起并扎口，在塑料上面扎小口透气，将包装箱整体放入 4℃的人工气候箱贮藏，温度变幅为±0.5℃；（8）打破休眠：在步骤（7）的条件下贮藏30 d时，用游标卡尺测量生根苗的芽长及鳞茎高度，当生根苗的芽长与鳞茎高度的比值超过 0.7时，说明小鳞茎已经解除休眠；上述所有MS 培养基指在MS基本培养基中添加了质量浓度3%的蔗糖、6.5 g/L的琼脂，p H 为 5.8的培养基。