[发明专利]一种梨PbrRALF2蛋白质的体外表达及其多克隆抗体的制备方法在审
| 申请号： | 201810483185.4 | 申请日： | 2018-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN108642073A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 张绍铃;寇小兵;吴巨友;曹鹏;王鹏;齐开杰;谢智华 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/29;C12P21/02;C07K14/415;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/14;C07K16/16;G01N33/68 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛;李晓峰 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种梨PbrRALF2蛋白质的体外表达及其多克隆抗体的制备方法,通过设计引物克隆梨花粉PbrRALF2基因；构建大肠杆菌重组表达载体PbrALF2‑pCold‑TF；将构建的重组表达载体PbrRALF2‑pCold‑TF转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，构建表达梨PbrRALF2蛋白质的重组菌株；对重组菌株进行表达，并用镍柱亲和层析法纯化重组梨PbrRALF2蛋白质；以纯化的重组梨PbrRALF2蛋白质为抗原，采用多克隆抗体制备方法制备梨PbrRALF2多克隆抗体。通过本发明的方法，实现了梨PbrRALF2蛋白的体外表达，并制备出了效价高、特异性好的梨PbrRALF2多克隆抗体，完全可以满足相关实验及产业化的需求。 | ||
| 搜索关键词： | 多克隆抗体 蛋白质 制备 体外表达 构建 重组菌株 多克隆抗体制备 大肠杆菌重组 镍柱亲和层析 重组表达载体 大肠杆菌 表达载体 设计引物 产业化 抗原 梨花 效价 蛋白 克隆 并用 基因 转化 | ||
【主权项】：
1.一种梨RALF蛋白质体外表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：a.提取梨花粉总RNA，反转录成cDNA，设计引物PCR扩增梨PbrRALF2基因；b.构建表达梨PbrRALF2蛋白质的原核重组表达载体；c.将步骤b构建的原核重组表达载体转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中，构建PbrRALF2重组表达菌株；d.培养步骤c所构建的PbrRALF2重组表达菌株至OD600达到0.4‑0.6，并低温处理后，加入诱导剂IPTG，诱导表达梨PbrRALF2蛋白质；e.纯化诱导表达的梨PbrRALF2蛋白质。
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