[发明专利]一种提高CIK细胞增殖效率的培养方法

摘要

本发明公开了一种提高CIK细胞增殖效率的培养方法。本发明发现，表原莪术烯醇、莪术烯醇、苦蘵内酯A、苦蘵内酯F和魏察苦蘵素A可以激活CIK细胞中颗粒酶B的表达，为有效的颗粒酶B激活剂；颗粒酶B激活剂表原莪术烯醇、莪术烯醇、苦蘵内酯A、苦蘵内酯F和魏察苦蘵素A可以显著提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤力。本发明还提供了制备表原莪术烯醇、莪术烯醇、苦蘵内酯A、苦蘵内酯F和魏察苦蘵素A的方法，该方法不依赖于反复柱层析，适用于工业化大规模制备。现有技术没有公开过本发明公开的技术方案。

主权项

1.一种CIK细胞的培养方法，其特征在于：取外周抗凝血100mL，加入淋巴细胞分离液，1500rpm离心15min，吸取单个核细胞层，用生理盐水洗涤3次，每次1500rpm离心10min；最后一次离心后重悬细胞，按细胞数5×106个/mL加含有500μg/L CD3mAB、1000U/mL IL‑2和10％FBS的GT‑T551培养基诱导培养成CIK细胞，每隔2～3d半量换液。诱导培养7天后，用新的含有500μg/L CD3mAB、1000U/mL IL‑2和10％FBS的GT‑T551培养基调整细胞数为2×106/ml，并加入颗粒酶B激活剂至终浓度为4‑6μM，刺激培养2d后，换成含有500μg/L CD3mAB、1000U/mL IL‑2和10％FBS的GT‑T551培养基继续培养，每隔2～3d半量换液。所述颗粒酶B激活剂为莪术烯醇。