[发明专利]一种鸡蛋卵白蛋白的克级层析方法在审
| 申请号： | 201810501051.0 | 申请日： | 2018-05-23 |
| 公开（公告）号： | CN108623673A | 公开（公告）日： | 2018-10-09 |
| 发明（设计）人： | 麻小娟;梁汭;陆加加 | 申请（专利权）人： | 遵义医学院 |
| 主分类号： | C07K14/77 | 分类号： | C07K14/77;C07K1/18 |
| 代理公司： | 遵义市遵科专利事务所 52102 | 代理人： | 刘创先 |
| 地址： | 563000 贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鸡蛋卵白蛋白的克级层析方法，属于蛋白分离技术领域，其步骤是：1）、鸡蛋清处理液的制备：新鲜鸡蛋去壳并分离出蛋清，搅拌后加入蒸馏水和盐酸调pH，搅拌离心；2）、层析柱的制备：采用CM‑sepharose FF柱材，蒸馏水置换除去酒精，按常规装柱；3）、层析分离：用20 mmol/L醋酸‑醋酸钠pH4.0平衡柱子，上样，控制流速在2.5ml/min，用醋酸‑醋酸钠pH5.5洗脱；4）、蛋白纯度检测：取样10μl与10μl上样缓冲液混合后，取15μl加入聚丙烯酰胺凝胶SDS‑PAGE胶孔内，电泳后，凝胶经考马斯亮蓝显色；5）、蛋白质的浓缩：将收集到的蛋白质纯品用PEG浓缩后，即得。本发明采用一根阳离子交换层析柱克级分离卵白蛋白，每次上样分离可得卵白蛋白约2.1克。 | ||
| 搜索关键词： | 蒸馏水 醋酸 鸡蛋卵白蛋白 卵白蛋白 醋酸钠 级层 上样 制备 蛋白质 阳离子交换层析柱 聚丙烯酰胺凝胶 蛋白分离技术 考马斯亮蓝 上样缓冲液 电泳 层析分离 蛋白纯度 平衡柱子 新鲜鸡蛋 层析柱 处理液 鸡蛋清 蛋清 凝胶 取样 去壳 洗脱 显色 柱材 装柱 盐酸 酒精 置换 浓缩 检测 | ||
【主权项】：
1.一种鸡蛋卵白蛋白的克级层析方法，其特征步骤是：1）、鸡蛋清处理液的制备：新鲜鸡蛋去壳并分离出蛋清，冰浴中用玻璃棒缓慢搅拌至没有块状物质后，加入等体积蒸馏水并用1M盐酸调pH至6.0，4℃搅拌3h后，3000g离心10分钟；上清收集后用1M盐酸调pH到3.8，4℃搅拌3h后再次离心，上清液于‑20℃冻存备用；2）、层析柱的制备：采用CM‑sepharose FF柱材，蒸馏水置换5‑6次以除去酒精，按常规装柱 2.5cm×40cm；3）、层析分离：用20 mmol/L 醋酸‑醋酸钠 pH4.0 平衡柱子，至紫外监测仪读数稳定，上样40ml鸡蛋清处理液，控制流速在2.5 ml/min，用醋酸‑醋酸钠 pH5.5 洗脱；4）、蛋白纯度检测：将分离所得蛋白收集，取样10μl与10μl上样缓冲液混合后，取15μl加入聚丙烯酰胺凝胶 SDS‑PAGE 胶孔内，电泳后，凝胶经考马斯亮蓝显色；5）、蛋白质的浓缩：将收集到的蛋白质纯品用PEG浓缩，透析后于‑20℃冻存。
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