[发明专利]一种表达纯化重组CXCL9蛋白的方法及其应用

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种利用促溶标签和内含肽(Intein)融合表达实现重组CXCL9蛋白在大肠杆菌可溶性表达的方法及其应用。所述方法将目的蛋白与促溶标签及具有自剪切功能的Intein融合表达，从而实现目的蛋白的可溶性表达及剪切释放。与已知的大肠杆菌表达重组CXCL9蛋白的方法相比，本发明所述方法可避免包涵体变性复性过程，并无需引入蛋白酶，能够得到序列完全天然的目标产物，对于放大规模的工业生产具有很好的应用前景。

主权项

1.一种表达纯化重组CXCL9蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)构建CXCL9融合蛋白表达载体：将CXCL9蛋白编码基因序列与具有自剪接功能的内含肽编码基因序列以及促溶标签编码基因序列融合后获得融合蛋白表达单元，并将所述融合蛋白表达单元插入表达质粒上，构建获得融合蛋白表达载体；(2)将步骤(1)中所得融合蛋白表达载体转化宿主，获得转化的宿主，并在表达的条件下培养转化的宿主至所需的菌种密度，诱导表达由标签、内含肽、CXCL9组成的融合蛋白，通过内含肽的剪切作用释放目的蛋白‑‑重组CXCL9蛋白；(3)诱导结束后收集宿主菌，破碎后去除不溶性物质，提取上清液，得到可溶性的重组CXCL9蛋白；(4)进行重组CXCL9蛋白的分离纯化，得到纯的重组CXCL9蛋白。