[发明专利]一种鸡蛋清过敏原分离方法

摘要

本发明公开了一种鸡蛋清过敏原分离方法，属于蛋白分离技术领域，其步骤包含：1）鸡蛋清处理液调pH和离心配制处理，2）层析柱制备，3）层析分离，4）蛋白纯度检测，5）、蛋白质的浓缩。本发明应用阳离子交换层析法，将鸡蛋清处理后上样，通过洗脱液pH值和盐浓度调整，使四种蛋白质依次洗脱下来，经蛋白纯度检测验证，BCA法检测后计算卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类粘蛋白和溶菌酶的提取率分别为60.0%、52.1%、29.6%和90.2%。

主权项

1.一种鸡蛋清过敏原分离方法，其特征步骤为：1）、鸡蛋清处理液配制：新鲜鸡蛋去壳并分离出蛋清，冰浴中用玻璃棒缓慢搅拌至没有块状物质后，加入等体积蒸馏水并用1M盐酸调pH至6.0，4℃搅拌3h后，3000g离心10分钟；收集上清液，用1M盐酸调pH到3.8，4℃搅拌3h后再次离心，收集上清液于‑20℃冻存备用；2）、层析柱制备：取GE公司的CM‑sepharose FF柱材，蒸馏水置换5‑6次除去酒精，按常规装柱1.6cm×20cm，最终柱体积为30ml；3）、层析分离：用20 mmol/L 醋酸‑醋酸钠 pH4.0平衡柱子，至紫外监测仪读数稳定；上样5ml鸡蛋清处理液，控制流速在1.5ml/min，待穿过峰洗出后换上含0～0.2mol/L NaCl 醋酸‑醋酸钠 pH4.3 洗脱，200min后换成用含0.1～0.2mol/L NaCl 醋酸‑醋酸钠 pH5.5 洗脱；待315 min时第4峰出峰结束，换上含0～0.4 mol/L NaCl PBS缓冲液 pH7.4 洗脱，直至出完最后两峰，分离结束；4）、蛋白纯度检测：将分离所得蛋白收集，取样10μl与10μl上样缓冲液混合后，取15μl加入聚丙烯酰胺凝胶 SDS‑PAGE 胶孔内，电泳后，凝胶经考马斯亮蓝显色进行检测；5）、蛋白质的浓缩：将收集到的四种蛋白质纯品用PEG浓缩，透析后冻干，于‑20℃冻存。