[发明专利]一种分子标记辅助选育长荚豇豆品种的方法

摘要

本发明公开了一种分子标记辅助选育长荚豇豆品种的方法，包括如下步骤：1)群体构建；2)DNA提取；3)表型调查；4)作图标记基因型分析；5)与荚长紧密连锁的SNP标记的获得；6)SNP标记转化为CAPS标记；7)利用CAPS标记辅助筛选长荚后代。本发明准确性和效率高、简便易操作、成本低；所有携带2_49346位点长荚基因型的豇豆品种在用于育种时都可以运用本方法辅助选择长荚性状，满足大多数实验室田间育种工作。

主权项

1.一种分子标记辅助选育长荚豇豆品种的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)群体构建：利用短荚豇豆品种ZN016和长荚豇豆品种ZJ282杂交构建含若干单株的F2群体，提取F2植株DNA；2)DNA提取：利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量，稀释DNA浓度到50ng/μL备用；3)表型调查：在F2群体豇豆豆荚完全成熟荚长不再伸长时，每株选取10个成熟豆荚用直尺量取豆荚长度，取平均数作为荚长表型；4)作图标记基因型分析：根据豇豆荚长QTL粗定位结果，在国际豇豆整合遗传图谱上选择多个SNP标记对F2群体进行SNP基因型分析；5)与荚长紧密连锁的SNP标记的获得：对多个SNP标记进行连锁作图，构建区域性饱和遗传图谱，根据F2基因型和表型数据扫描QTL，检测到LOD值最高的主效QTL，该QTL即为与豇豆荚长基因紧密连锁SNP标记之一；6)SNP标记转化为CAPS标记：根据步骤5)所得SNP标记的侧翼序列来比对豇豆基因组，得到了一段236bp的序列，并找到能够引起酶切多态性的限制性内切酶HpaII识别位点，根据上述236bp序列，设计跨越HpaII识别位点的侧翼引物F引物和R引物，利用上述引物对豇豆长荚和短荚亲本DNA分别进行PCR扩增，再用HpaII酶对PCR产物进行酶切揭示多态性，所述的F引物和R引物分别为，F引物：TAGCCACCACCATCTTCCTC，R引物：CTCGCAGTTTGGAGCATCTT；7)利用CAPS标记辅助筛选长荚后代：利用上述引物对待测豇豆杂交或回交后代进行PCR扩增，利用HpaII酶对扩增产物进行酶切后电泳，若待测样品出现与短荚亲本相同的带型则该材料具有和短荚亲本一致的荚长QTL基因型，可推断该材料为短荚材料；若待测样品出现与长荚亲本相同的带型则该材料具有和父本一致的荚长基因型，可推断该材料为长荚材料。