[发明专利]一种透明质酸脂质体紫外指纹图谱方法测定透明质酸含量

摘要

透明质酸(HA)是由糖醛酸和葡糖胺为双糖结构聚合组成的大型多糖，已广泛应用于临床治疗、生物材料以及化妆品行业。脂质体是类似微型胶囊的剂型，以脂质体为载体的药物或其他功效成分易进入角质层，在表皮和真皮内形成药物储库，药物持续发挥功效，现已成为皮肤病药物治疗和化妆品的研究热点。每种物质有其特有的、固定的吸收光谱曲线，根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低可判别或测定该物质的含量。由于HA脂质体中脂质体骨架成分含有磷脂和胆固醇等，对HA含量的直接检测会造成干扰，所以本发明建立了简单、快速的HA脂质体紫外指纹图谱检测方法检测其中HA的含量。本发明的特点是操作简便，设备简单，无需有机试剂等破乳。

主权项

1.一种涉及到紫外全波长透明质酸(hyaluronic acid,HA)指纹图谱方法检测HA脂质体中HA含量。每种物质有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的存在和含量。由于HA脂质体中脂质体骨架成分含有磷脂和胆固醇等，对HA含量的直接检测会造成干扰，所以本发明基于HA特有的双糖结构单位，通过紫外的强穿透能力直接对HA脂质体进行全波长扫描，建立了HA脂质体的紫外全波长HA指纹图谱检测方法(无需有机试剂等破乳)，步骤如下：A.准备工作：a.HA标准溶液制备：称取适量医用级HA，加入双蒸水稀释，配制成10mg/mL。b.HA脂质体标准品制备：称取2.0g磷脂、0.4g吐温80、0.4g胆固醇、10g乙醇于烧杯中，加入转子于磁力搅拌器上搅拌均匀，直至磷脂全部溶解。将此磷脂溶液经注射器匀速、快速注入预热至50℃的上述HA标准溶液中，搅拌直至乙醇除尽。通过高压均质机对脂质体混悬液反复均质，Malvern Zetasizer Nano ZS90检测脂质体粒径。c.空白脂质体对照制备：步骤如上所述，配制磷脂溶液，将此磷脂溶液经注射器匀速、快速注入预热至50℃的dH2O中，搅拌直至乙醇除尽，高压均质机对混悬液进行均质。B.紫外分光光度计全波长扫描(200‑1000nm)分别取1mL HA、HA脂质体、空白脂质体于各试管，置于冰水浴中，各管缓慢加5mL 0.025M四硼酸钠硫酸溶液，摇匀，95℃水浴15min后冰水浴迅速冷却，各管加0.2mL 0.125％咔唑乙醇溶液，摇匀后95℃水浴15min，冷却至室温。用紫外分光光度计全波长扫描反应液。C.建立HA脂质体浓度和HA指纹特征波谱峰下面积的标准曲线。D.按照上述标准曲线，计算各类HA脂质体样品中HA含量。