[发明专利]ddx19基因缺失斑马鱼突变体的制备方法在审
| 申请号： | 201810527943.8 | 申请日： | 2018-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN108715862A | 公开（公告）日： | 2018-10-30 |
| 发明（设计）人： | 张庆华;时灿;岳倩文;李伟明 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 曹莉 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种斑马鱼ddx19基因缺失突变体的制备方法；包括如下步骤：确定ddx19基因敲除的靶点在斑马鱼ddx19基因第1个外显子上，设计gRNA序列；以pUC19‑‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑ddx19‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；PCR产物进行纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼胚胎一细胞期中，培养获得稳定遗传的ddx19基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，获得可稳定遗传的ddx19基因缺失斑马鱼突变体。另外，本发明还公开了ddx19基因缺失斑马鱼突变体的表型，将为其生物学功能研究以及疾病建模提供基础支持。 | ||
| 搜索关键词： | 斑马鱼 基因缺失 突变体 稳定遗传 制备 基因缺失突变体 斑马鱼胚胎 基因突变体 生物学功能 基础支持 基因敲除 体外转录 外显子 靶点 表型 建模 引物 质粒 蛋白 细胞 基因 疾病 研究 | ||
【主权项】：
1.一种斑马鱼ddx19基因缺失突变体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、确定ddx19基因敲除的靶点在斑马鱼ddx19基因第1个外显子上，设计gRNA序列；S2、设计合成gRNA的上游引物T7‑ddx19‑sfd、下游引物tracr rev；S3、以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑ddx19‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；S4、对步骤S3的PCR产物进行体外转录，转化获得gRNA；S5、将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼中；S6、培养获得稳定遗传的斑马鱼ddx19基因突变体。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海海洋大学，未经上海海洋大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810527943.8/，转载请声明来源钻瓜专利网。
