[发明专利]一种基于杆状病毒载体的鲤疱疹病毒II型DNA疫苗及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201810534457.9 | 申请日： | 2018-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN108728490B | 公开（公告）日： | 2021-03-26 |
| 发明（设计）人： | 贡成良;曹广力;李坤;刘波;胡小龙;薛仁宇 | 申请（专利权）人： | 苏州大学 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N15/38;C12N5/10;C12N15/62;A61K39/245;A61P31/22 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 孙周强;陶海锋 |
| 地址： | 215137 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： |
本发明涉及一种基于杆状病毒载体的鲤疱疹病毒II型DNA疫苗及其构建方法与应用。将鲤疱疹病毒II型ORF72、ORF66、ORF81和ORF82的1‑186、993‑1197、603‑783、85‑186 nt区域序列的密码子经优化后，化学合成ORF72‑ORF66‑ORF81‑ORF82融合序列，尔后，用启动子控制，克隆进杆状病毒转移载体pFSATBac |
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| 搜索关键词： | 一种 基于 杆状病毒 载体 疱疹病毒 ii dna 疫苗 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种基于杆状病毒载体的鲤疱疹病毒II型DNA疫苗的构建方法，其特征在于，包括下列步骤：（1）将启动子克隆进pFSATBacDual的SmaⅠ/XhoⅠ位点获pFSATBacDual‑FA载体；所述启动子的序列如SEQ ID NO:1所示；（2）将融合DNA序列克隆进pFSATBacDual‑FA的XhoI/ KpnI位点，获pFSATBacDual‑FA‑D4ORF质粒；所述融合DNA的序列如SEQ ID NO:2所示；（3）将pFSATBacDual‑FA‑D4ORF质粒转化DH10/Bac感受态细胞，然后涂布于LB 琼脂培养基平板上，于37℃培养，再挑取白色菌落，提取重组Bacmid‑FA‑D4ORF DNA；（4）将重组Bacmid‑FA‑D4ORF DNA转染家蚕培养细胞，于26～27℃培养至细胞发病，然后收集细胞培养上清，获重组病毒BmNPV‑ FA‑D4ORF；（5）将重组病毒BmNPV‑ FA‑D4ORF接种家蚕或家蚕培养细胞，发病后，收集家蚕血淋巴或家蚕培养细胞上清，离心纯化得到病毒粒子，为基于杆状病毒载体的鲤疱疹病毒II型DNA疫苗；或者（6）将重组病毒BmNPV‑ FA‑D4ORF接种家蚕，然后将发病家蚕匀浆、冷冻干燥，制作冻干粉，为基于杆状病毒载体的鲤疱疹病毒II型DNA疫苗。
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