[发明专利]一种基于重组汉逊酵母细胞技术高效培养、表达乙肝表面抗原的方法在审
| 申请号： | 201810537430.5 | 申请日： | 2018-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN108715815A | 公开（公告）日： | 2018-10-30 |
| 发明（设计）人： | 李贵兴;张平;陈新亭;李纯厚;姜晓娟;刘立斌 | 申请（专利权）人： | 艾美汉信疫苗（大连）有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12P21/02;C07K14/02;C12R1/78 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 赵淑梅;李馨 |
| 地址： | 116000 辽宁省大连市金州新区湾*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于重组汉逊酵母细胞技术高效培养、表达乙肝表面抗原的方法，属于医药生物工程技术领域。本发明所述方法包括一级种子培养步骤、二级种子培养步骤、三级种子培养步骤、发酵培养步骤。本发明中重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)细胞扩增、培养表达后的细胞密度比现有基因重组乙肝疫苗细胞扩增、培养表达的细胞密度更高，HBsAg表达量更高，且HBsAg颗粒结构完整，细胞颗粒大小均一。 | ||
| 搜索关键词： | 汉逊酵母细胞 乙肝表面抗原 高效培养 细胞扩增 基因重组乙肝疫苗 重组乙型肝炎疫苗 二级种子培养 三级种子培养 一级种子培养 医药生物工程 细胞 发酵培养 汉逊酵母 颗粒结构 细胞颗粒 表达量 密度比 均一 | ||
【主权项】：
1.一种基于重组汉逊酵母细胞技术高效培养、表达乙肝表面抗原的方法，其特征在于：所述方法包括一级种子培养步骤、二级种子培养步骤、三级种子培养步骤、发酵培养步骤；所述发酵培养步骤为：取25L三级种子培养物接种于100‑150L发酵培养基中，28‑32℃培养88‑95h；所述发酵培养基，按重量份，由下述组份组成：![]()
生长期的搅拌速度由200rpm增加至500rpm，pH值为4.85‑5.25，空气流量由100L/min增加至300L/min，溶氧不低于10％；补料期保持生长期的发酵条件不变，当溶氧升至最大值时，加入8‑10L甘油，反复6‑8次；诱导期的搅拌速度由500rpm降低至450rpm，pH值为5.35‑5.75，空气流量由150L/min降低至20L/min，溶氧为60‑90％，并且，在加入最后一次甘油后溶氧升至最大值时，开始先流加体积比为1：4‑6的甘油甲醇混合液25‑30L，再流加甲醇70‑80L，流加的速度为10‑40mL/min。
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