[发明专利]基于片段长度多态性PCR的中药桃仁的鉴定方法在审
| 申请号： | 201810555435.0 | 申请日： | 2018-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN108676862A | 公开（公告）日： | 2018-10-19 |
| 发明（设计）人： | 查代明;魏萌;石红璆;张炳火;李汉全 | 申请（专利权）人： | 九江学院 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京正联知识产权代理有限公司 32243 | 代理人： | 王素琴 |
| 地址： | 332000 *** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于片段长度多态性PCR的中药桃仁的鉴定方法，具体包括以下步骤：(1)准备好所需的原材料以及反应试剂；(2)提取步骤(1)中原材料的基因组DNA；(3)将基因组DNA、引物1、引物2、水和反应试剂构成PCR反应体系，在梯度PCR仪上，进行预变性、变性、退火、延伸、再延伸四个步骤循环若干次；(4)引物设计与筛选：从GeneBank数据库中搜集原材料基原植物或/和同属近缘种基原植物的叶绿体petA‑psbJ序列；进行序列比对后设计片段长度多态性PCR引物；将设计好的引物经过步骤(3)PCR扩增后，依据种间特异性、种内通用性原则筛选出鉴定引物；(5)PCR鉴定：经过筛选得出PCR鉴定引物为TR1和TR2；(6)PCR产物的纯化、克隆与测序。 | ||
| 搜索关键词： | 引物 片段长度多态性 桃仁 基因组DNA 反应试剂 原植物 筛选 退火 中药 步骤循环 鉴定引物 序列比对 引物设计 梯度PCR 近缘种 叶绿体 预变性 延伸 变性 测序 种间 数据库 克隆 搜集 | ||
【主权项】：
1.一种基于片段长度多态性PCR的中药桃仁的鉴定方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)前期准备：准备好所需的原材料以及反应试剂，待用；(2)样品DNA提取：提取步骤(1)中原材料的基因组DNA，待用；(3)PCR扩增：将基因组DNA、引物1、引物2、水和反应试剂构成PCR反应体系，在梯度PCR仪上，进行预变性、变性、退火、延伸、再延伸四个步骤循环若干次，将目的片段进行PCR扩增；(4)引物设计与筛选：从GeneBank数据库中搜集原材料基原植物或/和同属近缘种基原植物的叶绿体petA‑psbJ序列；进行序列比对后设计片段长度多态性PCR引物；将设计好的引物经过步骤(3)PCR扩增后，依据种间特异性、种内通用性原则筛选出鉴定引物；(5)PCR鉴定：经过筛选得出PCR鉴定引物为TR1和TR2；再将引物TR1和TR2经过PCR扩增进行鉴定；(6)PCR产物的纯化、克隆与测序：根据Gel Extraction Kit的说明进行PCR产物纯化，然后再根据pMDTM 18‑T Vector Cloning Kit的说明与T载体进行过夜连接，连接产物用感受态细胞E.coli DH5α进行转化，菌落PCR后提取阳性质粒进行测序；然后在NCBI/BLAST/blastn中进行序列比对以确定PCR产物的片段长度及检验该方法的准确性，从而鉴定中药桃仁的种类。
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