[发明专利]一种嗜酸性氧化亚铁硫杆菌的培养方法

摘要

本发明涉及一种嗜酸性氧化亚铁硫杆菌的培养方法，本发明第一阶段通过普通摇床培养及连续传代获得高活性高浓度嗜酸性氧化亚铁硫杆菌体，第二阶段通过在外加电势协同作用下继续培养，在此期间，监控培养体系内阴极电势的变化，定时取样并测定亚铁氧化速率、菌浓和氧化还原电位，将经电化学刺激的嗜酸性氧化亚铁硫杆菌液进行转接传代，获得高密度和高亚铁氧化速率菌株，该方法运行成本低、具有创新性及广泛的应用价值。

主权项

1.一种嗜酸性氧化亚铁硫杆菌的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)种子液制备：制备pH1.8、含4.5g/L Fe2+的9K液体培养基，接种嗜酸性氧化亚铁硫杆菌的初始菌液，然后在28～32℃、170～190r/min的恒温摇床中进行培养，培养至菌液由浅绿色变深至红棕色且氧化还原电位达到560mV，得到种子液；(2)扩大培养：取步骤(1)制得的种子液，接种到含4.5g/L Fe2+的9K液体培养基中，然后在28～32℃、170～190r/min的恒温摇床中进行培养，得到菌液；(3)菌体的收集：待步骤(2)的菌液的氧化还原电位达到560mV时，立即进行抽滤，将抽滤后的滤液进行离心，得到高活性嗜酸性氧化亚铁硫杆菌菌体；(4)菌体的接种和培养：采用双室微生物燃料电池设备，该设备包含阴极室与阳极室，阴极室与阳极室之间用质子交换膜隔开，往阳极室中加入阳极工作电极和不含Fe2+的9K培养基，往阴极室中加入阴极工作电极、磁力转子和含4.5g/L Fe2+的9K培养基，往含4.5g/L Fe2+的9K培养基中接种步骤(3)的高活性嗜酸性氧化亚铁硫杆菌菌体，接种后，在28～32℃、170～190r/min的条件下进行培养；(5)外加恒定电势刺激嗜酸性氧化亚铁硫杆菌：将数据采集器的阴阳极分别与阴极工作电极和阳极工作电极连接，两个工作电极之间串联一个50Ω的外加电阻，数据采集器通电后，每隔12h测定阴极室菌液的氧化还原电位，电位达到540～560mV后，通过双室微生物燃料电池进样口再次补充4.5g/L的Fe2+，将可控编程电源的正、负极分别连接阴极工作电极和参比电极，在0.1～0.6V的外加恒定电势下进行刺激，刺激时间为50～60h，得到外加电刺激后的菌液；(6)传代培养：将外加电刺激后的菌液作为接种菌液，接种到pH1.8、含4.5g/L Fe2+的9K液体培养基中，在28～32℃、170～190r/min的恒温摇床中进行传代培养，即得高密度和高亚铁氧化速率的嗜酸性氧化亚铁硫杆菌。