[发明专利]一种多因素协同进化提高隐甲藻DHA产量的方法

摘要

本发明公布了一种多因素协同进化获得高产二十二碳六烯酸隐甲藻ATCC30556突变菌株的方法。其特征是包含如下步骤：(1)隐甲藻细胞对烯禾啶和芝麻酚的敏感浓度的确定；(2)以烯禾啶作为选择压力对隐甲藻进行驯化获得高产油脂的突变菌株；(3)以上一步获得的菌株为出发菌株，以芝麻酚作为选择压力进行第二次驯化获得对芝麻酚不敏感的突变菌株；(4)在不敏感菌株中添加芝麻酚促进隐甲藻生物量的积累。利用本发明的方法对隐甲藻细胞进行定向驯化，能获得异样培养条件下对芝麻酚不敏感的菌株，通过体外添加芝麻酚可以进一步提高DHA的产率。通过本发明获得的突变菌株，在培养过程中添加1mM芝麻酚可以将DHA的产率大幅度提高130％。

主权项

1.一种多因素协同进化提高隐甲藻DHA产量的方法，其特征在于：基于特定酶的抑制剂，通过利用烯禾啶和芝麻酚对隐甲藻进行分步驯化，获得油脂高产且对芝麻酚不敏感的菌株；最终在突变菌株中通过体外添加芝麻酚进一步提高DHA的产率，具体操作包括：(1)通过体外敏感实验确定烯禾啶和芝麻酚的敏感浓度；(2)在液体C9N2培养基中添加10μM的烯禾啶并以1％的接种量接入野生型的隐甲藻细胞，进行定向驯化；(3)将上一步培养至对数期的细胞转接入含有10μM的新鲜C9N2培养基中继续驯化，以此连续传代培养至隐甲藻对此浓度的烯禾啶不敏感；(4)追加烯禾啶的浓度，继续驯化，直至烯禾啶的浓度加到60μM；(5)对获得突变菌株进行生物量和油脂含量的检测，鉴定突变菌株的油脂含量是否提高；(6)以筛选到的油脂含量提高的菌株为出发菌株以芝麻酚作为选择压力进行第二轮的定向驯化，直至突变菌株对芝麻酚不敏感；(7)以第二轮定向进化获得的菌株作为发酵菌株，在发酵过程中添加1mM的芝麻酚促进生物量的积累，进一步提高DHA的产率。