[发明专利]基于相转变溶菌酶纳米薄膜对微生物非基因改造的方法

摘要

本发明公开了一种基于相转变溶菌酶纳米薄膜对微生物进行非基因改造的方法，该方法通过使接枝引发剂的溶菌酶发生相转变，从而在微生物(细菌、真菌、细胞)表面粘附一层接枝引发剂的溶菌酶纳米薄膜，继而可以通过原子转移自由基聚合(ATRP)实现对微生物的ATRP反应，成功对微生物进行非基因改造。该方法基于类淀粉样蛋白的粘附力，可以快速而高效的对酵母菌进行改造。同时，体系具有良好的温和性，能够适用于各种类型的微生命体。

主权项

1.一种基于相转变溶菌酶纳米薄膜对微生物非基因改造的方法，其特征在于该方法由下述步骤组成：(1)将三乙胺、溶菌酶溶解于二甲亚砜中，在冰浴冷却和氮气保护下，加入N‑琥珀酰亚胺‑2‑溴异丁酸酯，室温搅拌4～5小时，然后将反应液在去离子水中透析，得到接枝引发剂的溶菌酶；(2)将1～100mmol/L三(2‑羧乙基)膦的4‑羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液用NaOH调节至pH值为5.0～10.0，然后将其与1～50mg/mL溶菌酶的4‑羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液混合均匀，并加入微生物，再将所得溶液铺展在基材表面，室温培育30～60分钟；随后将基材转移到质量分数为0.1％～1％的戊二醛水溶液中，室温交联30～60分钟，形成微生物活化涂层，即负载微生物的基材；(3)将1～100mmol/L三(2‑羧乙基)膦的4‑羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液用NaOH调节至pH值为5.0～10.0，然后将其与1～50mg/mL接枝引发剂的溶菌酶的4‑羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液混合均匀，再将负载微生物的基材倒扣在混合溶液表面，室温培育30～60分钟，使微生物表面粘附一层接枝引发剂的溶菌酶纳米薄膜，得到接枝引发剂的微生物；(4)将接枝引发剂的微生物浸没于0.12mol/L氯化钠水溶液中，在氮气保护下加入溴化亚铜和五甲基二乙烯三胺，混合均匀，再加入水溶性单体，室温反应1～3小时，用0.12mol/L氯化钠水溶液清洗，得到聚合物接枝的微生物。