[发明专利]一种敲除PLAC8基因的HEK293T细胞系构建方法在审
| 申请号： | 201810600701.7 | 申请日： | 2018-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN108823205A | 公开（公告）日： | 2018-11-16 |
| 发明（设计）人： | 薛璐;秦绪慧;刘庆华;沈金花;彭勇波;赵平;马立群;于孟飞;陈微微 | 申请（专利权）人： | 中南民族大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90;C12N5/10 |
| 代理公司： | 武汉华旭知识产权事务所 42214 | 代理人： | 刘天钰 |
| 地址： | 430074 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种敲除PLAC8基因的HEK293T细胞系构建方法，步骤如下：(1)、sgRNA设计；(2)、重组质粒构建；(3)、细胞转染；(4)、流式细胞术分选阳性细胞；(5)、单细胞培养；(6)、测序检测。本发明利用改进型的CRISPR/Cas9系统从HEK293T细胞中敲除PLAC8基因，操作简便，效果完整而彻底，与HEK293T细胞特性一起构成了理想的细胞模型，用于研究细胞内表观遗传学的改变。本发明还突破了构建敲除细胞系过程中的转染效率低及慢病毒包装两个瓶颈，提供了一种简便高效的构建敲减细胞系的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 敲除 细胞系构建 构建 基因 重组质粒构建 表观遗传学 单细胞培养 流式细胞术 测序检测 细胞模型 细胞转染 阳性细胞 转染效率 改进型 慢病毒 分选 瓶颈 细胞 研究 | ||
【主权项】：
1.一种特异性敲除人源PLAC8基因的sgRNA，其特征在于：包括序列A和序列B，所述sgRNA在PLAC8基因上的靶序列位于PLAC8基因的2号和3号外显子上，其中与2号外显子对应的sgRNA序列A为：5’‑GTGGTCGTTGTGACCCAACC‑3’，与3号外显子对应的sgRNA序列B为：5’‑ACTCTCTACAGGACCCGATA‑3’。
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