[发明专利]一种人体粪便菌标准样品制备、保藏和重复利用的方法

摘要

一种人体粪便菌标准样品制备、保藏和重复利用的方法，标准化样品的制备方法技术领域。其包括以下工艺步骤：1）样品来源；2）样品采集过程；3）提取粪便细菌；4）短期保藏；5）长期保藏；6）复苏。上述的一种人体粪便菌标准样品制备、保藏和重复利用的方法，设计合理，通过本发明制备得到的短期保藏样品，其保藏时间可以达到1～1.5年，得到的长期保藏样品，其保藏时间可以达到7～8年。另外，无论是短期保藏样品，还是长期保藏样品，复苏的样品菌相组成都与新鲜粪便的菌相组成十分接近，并没有发生较大的偏差，且活菌率均能达到85%以上。

主权项

1.一种人体粪便菌标准样品制备、保藏和重复利用的方法，其特征在于包括以下工艺步骤：1）样品来源选择健康，且不吸烟，前3周未使用抗生素、益生菌、益生原或泻药的人员作为样品来源；2）样品采集过程取供体排尿后进行粪便采集，收集好后立即将粪便样品转移到厌氧工作站中；3）提取粪便细菌在无菌的厌氧工作站中，称取粪便样，将粪便样溶解于PBS缓冲液中，离心,得到粪便细菌提取液；4）短期保藏在无菌的厌氧工作站中，将3）中的粪便细菌提取液与甘油按比例3:1～4:1的体积混合，用液氮速冻，随后保存在‑80℃冰箱，得到短期保藏样品；5）长期保藏在无菌的厌氧工作站中，将3）中的粪便细菌提取液中和复配保护剂按比例1：5的体积混合，调节PH至6.6～6.8，磁力搅拌15～20 min，真空冷冻干燥后，得到粉末样品保存于‑80℃冰箱，得到长期保藏样品；6）复苏将保藏的粪便菌样品取出，若是短期保藏样品按1:2的比与复苏液混匀，置于充10% CO2和90% N2的厌氧培养箱中37℃复苏1h；若是长期保藏样品按8% 的添加量添加到复苏液中，置于充10% CO2和90% N2的厌氧培养箱中37℃复苏1.5h，即可。