[发明专利]一种结直肠癌实体瘤原代细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201810607216.2 | 申请日： | 2018-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN110592018A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 张函槊;尹申意 | 申请（专利权）人： | 北京吉尚立德生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 11245 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅;张立娜 |
| 地址： | 100193 北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种结直肠癌原代细胞的培养方法。本发明提供了一种结直肠癌实体瘤原代细胞培养方法及配套试剂，该技术的核心是：(1)用温和细胞解离试剂处理结直肠癌实体瘤组织，最大程度的保证了组织中癌细胞的活力；(2)配制特殊的无血清培养基，利用悬浮培养体系对结直肠癌实体瘤来源的肿瘤细胞进行体外培养，保证癌细胞正常扩增的同时最大限度的排除正常细胞的干扰。利用本发明方法得到的结直肠癌原代细胞培养物可以用于多种细胞水平的体外实验、二代测序、构建动物模型、构建细胞系等等。可以预见，这种培养方法在结直肠癌的研究和临床诊断治疗领域具有广泛的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 结直肠癌 实体瘤 癌细胞 构建 原代细胞培养物 无血清培养基 悬浮培养体系 原代细胞培养 实体瘤组织 动物模型 临床诊断 配套试剂 试剂处理 体外培养 体外实验 细胞水平 原代细胞 正常细胞 肿瘤细胞 测序 解离 扩增 配制 保证 细胞 治疗 应用 研究 | ||
【主权项】：
1.一种培养结直肠癌实体瘤原代细胞的方法，包括如下步骤：/n(1)用样本解离液对结直肠癌实体瘤组织进行解离处理，获得结直肠癌实体瘤原代细胞；/n所述样本解离液由胶原酶I、胶原酶II、胶原酶IV和PBS组成；其中，所述胶原酶I在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶II在所述样本解离液中的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶IV在所述样本解离液中的终浓度为50-150U/mL；余量均为PBS；/n(2)利用结直肠癌实体瘤原代细胞培养基悬浮培养步骤(1)解离出来的结直肠癌实体瘤原代细胞；/n所述结直肠癌实体瘤原代细胞培养基由所述结直肠癌实体瘤原代细胞培养基由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白Wnt-3a、人重组蛋白Noggin、SB202190、A83-01、Primocin
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