[发明专利]一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC-CIK的方法

摘要

一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC‐CIK的方法，本发明涉及一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC‐CIK的方法。本发明的目的是为了提高诱导DC‑CIK细胞方法的细胞扩增能力及抗原递呈能力，本发明采用将抗CD3McAb预先包被用于培养DC‑CIK细胞的培养瓶，去除并反复洗涤后，再加入分离获得的单个核细胞，并且使用极少的培养液用于早期培养。这样可以大大提高CTC细胞于单个核细胞的接触几率，提高DC细胞对肿瘤的抗原递呈能力。将已捕获细胞进行原位培养进一步提高了CTC的纯度。解决了由于CTC的数量过少，而降低DC细胞对肿瘤细胞的抗原递呈能力。本发明应用于细胞培养领域。

主权项

1.一种利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC‑CIK的方法，其特征在于该方法为：一、用抗CD3McAb对用于DC‑CIK培养的器皿进行预处理：用无菌生理盐水配制浓度为15‑25μg/ml的抗CD3McAb溶液，然后过滤除菌，保存于‑80℃；取抗CD3McAb溶液涂覆细胞培养瓶内表面，4℃过夜；再用无菌生理盐水洗涤，得到预处理后的培养瓶A和B；二、分离外周血单个核细胞；三、另取外周血，利用试剂盒捕获CTC细胞，然后进行原位培养3‑5d；四、取步骤二分离的单个核细胞(1‑3)×107个加入到预处理后的培养瓶A中，然后用含自体血浆的DC‑CIK培养液补至45‑50mL，放置培养箱中孵育2‑3d，然后将培养瓶A中的培养液转移至另一预处理后的培养瓶B中，培养11d；再用含自体血浆的DC‑CIK培养液补至45‑50mL，培养8d，即完成利用抗CD3McAb与CTC相结合高效诱导DC‑CIK的方法；其中培养瓶A培养第3‑5天时，补充IL‑4、GM‑CSF，培养第6天补充步骤三培养的CTC细胞，培养第7天补充TNF‑α；培养瓶B培养第1一天，补充IFN‑r，培养第2、3、4、6和10天补充IL‑2、IL‑1α。