[发明专利]一种中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测方法

摘要

本发明公开一种中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测方法，该方法包括以下步骤：(1)色谱条件设置、(2)对照品溶液的制备、(3)PBS缓冲液的配制、(4)黄曲霉溶剂的提取和(5)黄曲霉溶剂的净化。本发明能有效缩短前处理时间，提高复杂的中药基质的纯化效果，降低杂峰数量，提高回收率。

主权项

1.一种中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)色谱条件设置：安捷伦Poroshell EC‑C18色谱柱(4.6mm*150mm，2.7μm)；流动相水(A)‑甲醇(B)—乙腈(C)，恒比例洗脱A：B：C＝64：18：18；流速1mL·min‑1；柱温35℃；进样量20μL；荧光检测器激发波长360nm，发射波长450nm，在此条件下，各色谱峰分离度均大于1.5，四种黄曲霉毒素在15min内即可完成分析；(2)对照品溶液的制备：精密移取黄曲霉毒素混合对照品1ml，置20ml量瓶中，用70％甲醇稀释至刻度，作为储备液；(3)PBS缓冲液的配制：取氯化钠8g，取氯化钾0.2g，取磷酸氢二钠1.44g，取磷酸二氢钾0.24g，以上混合加去离子水约800mL充分搅拌溶解，以浓盐酸调pH 7.2，定容1L，即得；(4)黄曲霉溶剂的提取：取步骤(3)的PBS缓冲液调制淋洗液，取本品粉末约2g，精密称定，置50mL离心管中，精密加入50％乙腈水溶液30mL，高速搅拌2分钟，加入氯化钠2.5g，震摇或涡旋至溶液分层，离心5分钟，黄曲霉毒素溶解于上层的乙腈层中，以移液枪精密量取上清液6mL转移至另一离心管中，并加入50ml淋洗液摇匀；(5)黄曲霉溶剂的净化：取步骤(4)提取的黄曲霉溶剂，以少量水多次润洗离心管，并转移至免疫亲和柱，流速每分钟3mL，用水20mL洗脱除杂，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，加入甲醇1.4mL洗脱，收集洗脱液，置2mL量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜滤过，取续滤液，供HPLC测定。