[发明专利]一种珍稀物种DNA信息获取方法在审
| 申请号： | 201810613464.8 | 申请日： | 2018-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN108715892A | 公开（公告）日： | 2018-10-30 |
| 发明（设计）人： | 杨仙玉;张先福;马敬华;刘建勋;施伟斌 | 申请（专利权）人： | 浙江农林大学;杭州野生动物世界有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12N15/10;C12N15/70;G06F19/24 |
| 代理公司： | 绍兴市知衡专利代理事务所(普通合伙) 33277 | 代理人： | 施春宜 |
| 地址： | 311300 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本申请涉及一种珍稀物种DNA信息获取方法，属于包含酶或微生物的测定或检测方法技术领域。获得华南虎的组织后，纯化DNA，并使DNA发生随机片段化，将DNA进行分离、回收，将回收的DNA进行加A催化反应，并与T‑载体进行连接反应，对连接产物进行转化，筛选出阳性菌落，过夜培养，进行质粒回收，测序，并进行特异性引物设计、合成，再次实施PCR及对PCR产物进行测序，并与引物设计时使用的序列进行比对，如果一致就表明该DNA片段的确是目标物种的DNA。将本申请应用于珍稀物种的DNA信息获取，具有操作简便、获取率高、成本低廉等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 物种 测序 随机片段化 特异性引物 催化反应 连接产物 连接反应 目标物种 阳性菌落 引物设计 质粒回收 回收 比对 申请 微生物 合成 筛选 检测 转化 应用 | ||
【主权项】：
1.一种珍稀物种DNA信息获取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取对应物种的组织，以酚/氯仿提取法纯化DNA，并对DNA样品进行涡旋震荡处理，使DNA发生随机性片段化；（2）对DNA片段进行分离，回收特定分子量的DNA，对回收得到的DNA进行TaqDNA聚合酶催化反应；（3）对催化产物进行T‑载体连接反应；（4）对连接产物进行转化；（5）对转化获得的菌落进行阳性菌落筛选，选出阳性菌落；（6）对筛选出来的阳性菌落进行过夜培养、质粒回收，对DNA片段进行测序，并进行特异性引物设计；（7）以步骤（1）中纯化得到的DNA为模板，以步骤（6）中得到的引物实施PCR以及对PCR产物再次测序，并与步骤（6）中的DNA测序进行比较，两者一致，即可确认其为对应物种的DNA。
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