[发明专利]一种人ATP7b基因外显子PCR扩增系统、检测试剂盒及其应用的方法

摘要

本发明属于人核酸体外检测技术领域，具体为人ATP7b基因的PCR扩增检测系统及其应用。PCR扩增检测系统包括：引物组、PCR反应母液容器及Sanger Sequencing后的序列分析；引物组容器包含引物SEQ ID No.1～SEQ ID No.42贮存液。本发明在DNA提取情况后(DNA质量满足要求：1.6≤OD260/OD280≤2.0，DNA最低浓度≥10.0ng/μL)，通过PCR反应对人ATP7b基因21个外显子目的片段同时扩增，通过目的片段的琼脂糖凝胶电泳进行ATP7b基因外显子有无缺失突变的判断，进而进行电泳凝胶DNA的回收纯化进行一代测序，通过测序片段的基因序列与Reference Sequence(权威数据库中参考序列)进行比对，最终进行目标序列中有无单碱基突变的判断，以期对人ATP7b基因全部外显子进行金标准方法探讨分析肝豆状核变性在分子遗传水平上的发病原因。而且，本方法操作简单，使用仪器设备普及度很高，适合推广使用。

主权项

1.一种用于人ATP7b基因21个外显子的PCR扩增系统，所述扩增系统包含以下外显子位点相对应的23对PCR扩增引物：位点Exon1，相对应的引物序列为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2；位点Exon2‑1，相对应的引物序列为SEQ ID No.3和SEQ ID No.4；位点Exon2‑2，相对应的引物序列为SEQ ID No.5和SEQ ID No.6；位点Exon2‑3，相对应的引物序列为SEQ ID No.7和SEQ ID No.8；位点Exon3，相对应的引物序列为SEQ ID No.9和SEQ ID No.10；位点Exon4，相对应的引物序列为SEQ ID No.11和SEQ ID No.12；位点Exon5，相对应的引物序列为SEQ ID No.13和SEQ ID No.14；位点Exon6，相对应的引物序列为SEQ ID No.15和SEQ ID No.16；位点Exon7，相对应的引物序列为SEQ ID No.17和SEQ ID No.18；位点Exon8，相对应的引物序列为SEQ ID No.19和SEQ ID No.20；位点Exon9，相对应的引物序列为SEQ ID No.21和SEQ ID No.22；位点Exon10，相对应的引物序列为SEQ ID No.23和SEQ ID No.24；位点Exon11，相对应的引物序列为SEQ ID No.25和SEQ ID No.26；位点Exon12，相对应的引物序列为SEQ ID No.27和SEQ ID No.28；位点Exon13，相对应的引物序列为SEQ ID No.29和SEQ ID No.30；位点Exon14，相对应的引物序列为SEQ ID No.31和SEQ ID No.32；位点Exon15，相对应的引物序列为SEQ ID No.33和SEQ ID No.34；位点Exon16，相对应的引物序列为SEQ ID No.35和SEQ ID No.36；位点Exon17，相对应的引物序列为SEQ ID No.37和SEQ ID No.38；位点Exon18，相对应的引物序列为SEQ ID No.39和SEQ ID No.40；位点Exon19，相对应的引物序列为SEQ ID No.41和SEQ ID No.42；位点Exon20，相对应的引物序列为SEQ ID No.43和SEQ ID No.44；位点Exon21，相对应的引物序列为SEQ ID No.45和SEQ ID No.46。