[发明专利]一种多肽及在促进骨髓间充质干细胞增殖方面的应用

摘要

本发明公开了一种多肽及在促进骨髓间充质干细胞增殖方面的应用，多肽制备方法为：1、六棱菊种子酶解，酶解液装入截留分子量为7000Da的透析袋透析，将含有分子量小于7000Da的透析袋外部水溶液浓缩、冻干，得多肽冻干粉；2、用DA201‑C型大孔树脂对多肽冻干粉初步分离纯化，依次用30％、45％、60％、75％乙醇梯度洗脱，各梯度洗脱4BV，收集各梯度洗脱液，浓缩、冷冻干燥得F30、F60、F75粗品；3、凝胶过滤色谱纯化：根据色谱图收集样品溶液中吸光度最高的色谱峰对应的流份，冷冻干燥，分别得多肽F30、F60、F75。本发明多肽可显著提高骨髓间充质干细胞增殖率，可用于骨髓间充质干细胞快速扩增。

主权项

1.一种促进骨髓间充质干细胞增殖的多肽，其特征在于，通过如下步骤制备而成：步骤1、六棱菊种子多肽冻干粉的制备六棱菊种子经碱性蛋白酶Alcalase2.4L+胰蛋白酶在复合配比3:1、pH为7.4、温度60℃、底物质量浓度40g/L、加酶量6％、酶解时间6h的条件下酶解，酶解结束后升温至90℃保持适当时间进行灭酶处理得六棱菊种子蛋白酶解溶液。将酶解液装入截留分子量为7000Da的透析袋中透析，将含有分子量小于7000Da的透析袋外部水溶液减压浓缩，然后将浓缩的多肽溶液于冷冻干燥机中冻干，即得六棱菊种子多肽冻干粉。步骤2、大孔树脂初步分离纯化采用DA201‑C型大孔树脂对多肽冻干粉按疏水性进行初步分离纯化：(1)先将树脂用无水乙醇浸泡24h，然后用无水乙醇洗至220nm无吸收，再用去离子水洗净后备用；常温下将浓度为50mg/mL的多肽冻干粉水溶液以0.5BV/h的流速流经层析柱，用紫外检测器检测流出液的吸光值A220，以A220＝0.05为穿透点；(2)上样结束后，用去离子水以1BV/h的流速冲洗层析柱，分管收集洗脱液，测定水的电导率，当电导率降至与去离子水相当时，依次采用30％、45％、60％的乙醇对吸附在大孔吸附树脂上的多肽冻干粉进行梯度洗脱，每个梯度洗脱4BV，收集60％乙醇洗脱液，45℃真空旋蒸浓缩至无醇味，冷冻干燥得F60粗品。步骤3、凝胶过滤色谱纯化将F60粗品配成浓度为50mg/mL的样品溶液，采用柱尺寸为1.6×100cm的Sephadex G‑15凝胶滤过色谱再进行进一步分离纯化，上样量1mL，洗脱液为去离子水，流速为15mL/h，检测波长220nm，根据色谱图收集样品溶液中吸光度最高的色谱峰对应的洗脱流份，冷冻干燥，得到多肽F60。