[发明专利]一种EB病毒DNA的定量检测方法在审
申请号: | 201810631220.2 | 申请日: | 2018-06-19 |
公开(公告)号: | CN108754024A | 公开(公告)日: | 2018-11-06 |
发明(设计)人: | 刘岱璿;唐笑 | 申请(专利权)人: | 长沙金域医学检验所有限公司 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/686 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 410000 湖南省长沙市高新开发区麓天路*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | 本发明公开一种EB病毒DNA定量检测的方法,涉及生物检测的技术领域。本发明提供的EBV DNA定量检测方法,是采用核酸释放剂快速裂解、释放样本中的EBV‑DNA,对血浆样本、外周血样本、咽拭子样本以及阴性阳性对照采取不同的提取方式,配以PCR反应液等组分,在荧光定量PCR仪上,应用实时荧光定量PCR检测技术,通过荧光信号的变化实现EB病毒DNA的定量检测。根据EBV DNA的准确报告值,能够对EB病毒进行定性定量的确定,该方法具有快速、准确、操作方便等优点。 | ||
搜索关键词: | 定量检测 样本 实时荧光定量PCR 荧光定量PCR仪 外周血样本 核酸释放 检测技术 快速裂解 生物检测 血浆样本 阳性对照 荧光信号 准确报告 咽拭子 检测 阴性 定性 释放 应用 | ||
【主权项】:
1.一种EB病毒DNA的定量检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)试剂配制:A、在试剂制备区内将试剂盒内各组分取出,室温融化后,离心数秒;B、设所需要的的管数为n,配制反应液;C、算好各试剂的使用量,加入到适当体积试管中,充分混匀,向设定的n个PCR反应管中分别加入40μL,转移至样本处理区;(2)样本处理:A、根据标本的不同选择不同的提取方式:血浆样本、外周血样本及咽拭子样本,选择相应的试剂盒,按照其说明书和注意事项进行提取即可,若提取好的DNA当天不使用,则要保存在‑20℃;B、取自配阴性对照、阳性对照按照外周血样本处理方法提取,取定量参考品10μL加核酸释放剂10μL混匀待用;(3)加样:向分装好反应液中加入处理好的DNA模板以及阳性质控品各10μL,盖紧PCR反应管管盖,转移至扩增区;(4)扩增:反应管瞬时离心后放入荧光定量PCR仪上,编号并设好各工作标准参数,按一定程序进行扩增:1个循环50℃,2min;1个循环94℃,5min;然后进行45个循环94℃,15s和57℃,30s;1个循环35℃,10s;(5)结果判断:根据检测样本中实测的拷贝数和Ct值,对检测报告进行定性和定量的确定。
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