[发明专利]一种EB病毒DNA的定量检测方法

摘要

本发明公开一种EB病毒DNA定量检测的方法，涉及生物检测的技术领域。本发明提供的EBV DNA定量检测方法，是采用核酸释放剂快速裂解、释放样本中的EBV‑DNA，对血浆样本、外周血样本、咽拭子样本以及阴性阳性对照采取不同的提取方式，配以PCR反应液等组分，在荧光定量PCR仪上，应用实时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现EB病毒DNA的定量检测。根据EBV DNA的准确报告值，能够对EB病毒进行定性定量的确定，该方法具有快速、准确、操作方便等优点。

主权项

1.一种EB病毒DNA的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)试剂配制：A、在试剂制备区内将试剂盒内各组分取出，室温融化后，离心数秒；B、设所需要的的管数为n，配制反应液；C、算好各试剂的使用量，加入到适当体积试管中，充分混匀，向设定的n个PCR反应管中分别加入40μL，转移至样本处理区；(2)样本处理：A、根据标本的不同选择不同的提取方式：血浆样本、外周血样本及咽拭子样本，选择相应的试剂盒，按照其说明书和注意事项进行提取即可，若提取好的DNA当天不使用，则要保存在‑20℃；B、取自配阴性对照、阳性对照按照外周血样本处理方法提取，取定量参考品10μL加核酸释放剂10μL混匀待用；(3)加样：向分装好反应液中加入处理好的DNA模板以及阳性质控品各10μL，盖紧PCR反应管管盖，转移至扩增区；(4)扩增：反应管瞬时离心后放入荧光定量PCR仪上，编号并设好各工作标准参数，按一定程序进行扩增：1个循环50℃，2min；1个循环94℃，5min；然后进行45个循环94℃，15s和57℃，30s；1个循环35℃，10s；(5)结果判断：根据检测样本中实测的拷贝数和Ct值，对检测报告进行定性和定量的确定。