[发明专利]一种茄子CRISPR/Cas9基因敲除载体的构建方法和应用在审
| 申请号： | 201810637465.6 | 申请日： | 2018-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN108728486A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 杨艳;庄勇;周晓慧;刘军 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/113;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/82 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 张素卿 |
| 地址： | 210014*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种茄子CRISPR/Cas9基因敲除载体的构建和应用，属于生物技术领域。是以茄子WRKY26基因的基因组DNA序列为参照，设计靶位点gRNA；构建靶位点gRNA和Cas9蛋白的表达盒；再将gRNA和Cas9蛋白的表达盒插入到双元表达载体pCAMBIA1301。将重组质粒转入农杆菌EHA105菌株中，并由EHA105介导转化茄子子叶，获得遗传转化植株，经PCR和测序验证确定突变株系。本发明以茄子SmWRKY26基因为例，快速简单高效率地对茄子基因进行了地定点突变。 | ||
| 搜索关键词： | 茄子 构建 基因敲除载体 靶位点 表达盒 蛋白 生物技术领域 双元表达载体 基因组DNA 定点突变 突变株系 遗传转化 重组质粒 植株 高效率 农杆菌 基因 测序 介导 子叶 应用 验证 转入 转化 | ||
【主权项】：
1.一种茄子CRISPR/Cas9基因敲除植株的构建方法，包括：将含gRNA和Cas9蛋白的表达盒插入到pCAMBIA1301载体中产生敲除编辑载体和农杆菌介导的茄子遗传转化，其特征在于，gRNA靶位点设计在SmWRKY26基因5’端，序列为：P1:5’‑ATTGCAGAGAGGACTGGTTC‑3’；其反向互补序列P2:5’‑GAACCAGTCCTCTCTGCAAT‑3’；扩增靶位点对应的引物序列：P3:5’‑GATTGATTGCAGAGAGGACTGGTTC‑3’；P4:5’‑AAACGAACCAGTCCTCTCTGCAATC‑3’。
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