[发明专利]一种胎盘来源的单个核细胞诱导CIK细胞的方法

摘要

本发明公开了一种胎盘来源的单个核细胞诱导CIK细胞的方法，通过采用胎盘来源的单个核细胞诱导培养CIK细胞，与采用脐带血单个细胞诱导培养相比，获得的CIK细胞CD3+CD56+双阳性率、扩增数量和存活率更高，可更好的满足肿瘤治疗的临床需求。

主权项

1.一种胎盘来源的单个核细胞诱导CIK细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，脐带血血浆分成两份，分别进行处理保存，其中，第一份脐带血血浆灭活后‑20℃冷冻保存，第二份脐带血血浆未经灭活，在4℃下保存备用；步骤2，细胞培养瓶中加入未经灭活的脐带血血浆，在4℃下包被过夜，或者在37℃下，包被3h；步骤3，包被结束，弃去细胞培养瓶中的脐带血血浆，对细胞培养瓶顺次用10ml PBS和10ml GT‑T551培养液各洗涤一次；步骤4，获取胎盘来源的单个核细胞，并用GT‑T551培养基制备细胞浓度为1～2×106/ml的胎盘来源的单个核细胞悬液；步骤5，向步骤3中的细胞培养瓶中加入步骤4中的细胞悬液，同时再加入步骤1中灭活脐带血血浆、IFN‑γ，使灭活脐带血血浆浓度为10％，IFN‑γ浓度为1000IU/ml，在37℃下、5％CO2培养箱中，培养24h；步骤6，加入与步骤5中细胞悬液体积相同的GT‑T551培养基，细胞培养瓶中加入IL‑1、CD3单抗、IL‑2、脐带血血浆，使其终浓度为IL‑1 100IU/ml、CD3单抗50ng/ml、IL‑2 300IU/ml、脐带血血浆10％，在37℃下、5％CO2培养箱中培养；步骤7，第4天，加入20ml GT‑T551培养液，并添加IL‑2，使IL‑2终浓度为300IU/ml，在37℃下、5％CO2培养箱中培养；步骤8，每隔2天或3天补加1次GT‑T551培养液，每次添加的GT‑T551培养液体积与培养瓶中液体体积相同，并补充IL‑2浓度至300IU/ml，在37℃下、5％CO2培养箱中培养；步骤9，第15天，收集培养瓶中的全部培养基及细胞，以500g/min离心10min，收集沉淀，沉淀即为CIK细胞。