[发明专利]荧光素酶报告基因法猪干扰素α生物学活性检测方法在审
| 申请号： | 201810641986.9 | 申请日： | 2018-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN108707642A | 公开（公告）日： | 2018-10-26 |
| 发明（设计）人： | 单雪芹;李雅森;刘家炉;凡玉芳;许高涛;赵雨;蒋敏之 | 申请（专利权）人： | 安徽九川生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/66 | 分类号： | C12Q1/66;C12N15/85;C12N15/65;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 陈娟 |
| 地址： | 241000 安徽省芜湖市经*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种荧光素酶报告基因法猪干扰素α生物学活性检测方法及其应用。该方法包括以下步骤：采用PCR扩增获取猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段；将pMx1的基因片段插入pGL3‑basic载体luc基因的5'端，再采用PCR扩增得到pMx1‑luc融合基因片段；用pMx1‑luc融合基因片段替代pEGFP‑N1载体中的pCMV和EGFP的基因片段，构建pMx1‑luc质粒，转染细胞，并选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养；以梯度稀释的猪干扰素α标准品制备标准曲线，将待检猪干扰素α样品加入克隆化培养后的细胞中共孵育，然后检测荧光强度，结合标准曲线评价待检猪干扰素α样品的效价。 | ||
| 搜索关键词： | 猪干扰素α 基因片段 荧光素酶报告基因法 生物学活性检测 融合基因片段 克隆化培养 转染细胞株 制备标准曲线 标准曲线 梯度稀释 样品加入 转染细胞 标准品 孵育 构建 效价 荧光 蛋白 筛选 细胞 检测 替代 应用 | ||
【主权项】：
1.一种荧光素酶报告基因法猪干扰素α生物学活性检测方法，其包括以下步骤：采用PCR扩增获取猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段；将PCR扩增获得的猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段插入pGL3‑basic载体luc基因的5'端，再采用PCR扩增得到pMx1‑luc融合基因片段；用pMx1‑luc融合基因片段替代pEGFP‑N1载体中的pCMV和EGFP的基因片段，构建pMx1‑luc质粒；用pMx1‑luc质粒转染细胞，并通过新霉素筛选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养；以梯度稀释的猪干扰素α标准品制备标准曲线，确定干扰素效价与荧光值之间的数学逻辑关系；将待检猪干扰素α样品加入克隆化培养后的细胞中，然后检测荧光强度，结合标准曲线评价待检猪干扰素α样品的效价。
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