[发明专利]一种鸡干扰素α生物学活性检测方法在审
| 申请号： | 201810642051.2 | 申请日： | 2018-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN108795982A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 单雪芹;刘家炉;徐文俊;王亚男;赵雨;蒋敏之 | 申请（专利权）人： | 安徽九川生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 陈娟 |
| 地址： | 241000 安徽省芜湖市经*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鸡干扰素α生物学活性检测方法及其应用。该方法包括以下步骤：采用PCR扩增获取鸡Mx蛋白的Mxp的基因片段；去除pEGFP‑N1载体质粒的pCMV；用PCR扩增获得的鸡Mx蛋白的Mxp的基因片段通过T4DNA连接酶替换原pEGFP‑N1载体质粒的pCMV，构建pEGFP‑N1‑Mxp质粒；用pEGFP‑N1‑Mxp质粒转染细胞，并通过新霉素筛选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养，加入鸡干扰素α与克隆化培养后的稳定转染细胞株共孵育，会激活Mx基因启动子活性促进细胞内EGFP的表达，通过激发光源照射后细胞发出荧光的强度与鸡干扰素α的生物学活性呈正相关，因此可以定量评价鸡干扰素α的生物学活性。 | ||
| 搜索关键词： | 转染细胞株 鸡干扰素 生物学活性检测 克隆化培养 生物学活性 基因片段 鸡Mx蛋白 载体质粒 细胞 种鸡 基因启动子活性 筛选 定量评价 激发光源 质粒转染 共孵育 新霉素 荧光 构建 去除 质粒 替换 照射 激活 应用 | ||
【主权项】：
1.一种鸡干扰素α生物学活性检测方法，其包括以下步骤：采用PCR扩增获取鸡Mx蛋白的Mxp的基因片段；用PCR扩增获得的鸡Mx蛋白的Mxp的基因片段通过T4DNA连接酶替换原pEGFP‑N1载体质粒中的pCMV的基因片段，构建pEGFP‑N1‑Mxp质粒；用pEGFP‑N1‑Mxp质粒转染细胞，并通过新霉素筛选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养；以梯度稀释的鸡干扰素α标准品制备标准曲线，确定干扰素效价与荧光值之间的数学逻辑关系；将待检鸡干扰素α样品加入克隆化培养后的细胞中，然后检测荧光强度，结合标准曲线评价待检鸡干扰素α样品的效价。
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