[发明专利]一种猪干扰素α生物学活性检测方法

摘要

本发明公开了一种猪干扰素α生物学活性检测方法及其应用。该方法包括以下步骤：采用PCR扩增获取猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段；去除pEGFP‑N1载体质粒的pCMV；用PCR扩增获得的猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段通过T4DNA连接酶替换原pEGFP‑N1载体质粒的pCMV，构建pEGFP‑N1‑pMx1质粒；用pEGFP‑N1‑pMx1质粒转染细胞，并通过新霉素筛选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养，加入猪干扰素α与克隆化培养后的稳定转染细胞株共孵育，会激活Mx1基因启动子活性促进细胞内EGFP的表达，通过激发光源照射后细胞发出荧光的强度与猪干扰素α的生物学活性呈正相关，因此可以定量评价猪干扰素α的生物学活性。

主权项

1.一种猪干扰素α生物学活性检测方法，其包括以下步骤：采用PCR扩增获取猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段；用PCR扩增获得的猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段通过T4DNA连接酶替换原pEGFP‑N1载体质粒中的pCMV的基因片段，构建pEGFP‑N1‑pMx1质粒；用pEGFP‑N1‑pMx1质粒转染细胞，并通过新霉素筛选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养；以梯度稀释的猪干扰素α标准品制备标准曲线，确定干扰素效价与荧光值之间的数学逻辑关系；将待检猪干扰素α样品加入克隆化培养后的细胞中，然后检测荧光强度，结合标准曲线评价待检猪干扰素α样品的效价。