[发明专利]一种奥兰丁的制备方法

摘要

本发明公开了一种奥兰丁的制备方法。本发明开发了适合黑曲霉的大米培养基及培养条件，大大提高奥兰丁(P‑orlandin)的产量，然后，采用新的分离纯化方法，使用萃取的方法去掉大部分非奥兰丁的化合物，进一步用中试用加压柱层析系统来进行大量分离，得到纯度>99％的奥兰丁纯化物。此方法极大地提高了黑曲霉中奥兰丁的产量及分离纯化奥兰丁的效率，并且显著的降低了生产成本，同时保证了奥兰丁的生物活性，适合用于对奥兰丁进行大量快速的分离纯化工作。

主权项

1.一种奥兰丁的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）培养黑曲霉菌：将黑曲霉接种至麦芽液体培养基中进行发酵，25～28℃，七天后得到黑曲霉发酵液；然后接种黑曲霉发酵液至大米培养基，在无菌环境下培养，培养条件为12 h光照/12 h黑暗、空气相对湿度为70±2%、温度为19‑37℃，培养7天后，按照100 mL麦芽液体培养基：600 g大米培养基的比例再加入麦芽液体培养基，再培养7天后，收集黑曲霉菌；所述的麦芽液体培养基：每升含有麦芽提取物10 g、酵母提取物1 g、氯霉素0.05 g，余量为蒸馏水；pH 7.2‑7.4；（2）奥兰丁的分离纯化：a. 取收集的黑曲霉菌，先加入适量甲醇，搅拌，再加入足量甲醇充分抽提，过滤，收集并干燥甲醇提取物，然后加入适量水，振荡制备成水悬液；b. 加入等量的乙酸乙酯进行萃取，弃去水相，蒸干乙酸乙酯，然后再加入适量甲醇，振荡制备成甲醇溶液；c. 加入等量己烷，充分振荡，弃去己烷相，得到奥兰丁半纯化物甲醇溶液；d. 然后用硅胶柱层析分离，使用乙酸乙酯/甲醇v/v，30/1，16/1，8/1，4/1，2/1，1/1，0/1 梯度洗脱，每次洗脱为2个柱体积的洗脱液，收集乙酸乙酯/甲醇体积比8/1洗脱的组分，再使用二氯甲烷/甲醇v/v 98/2，96/4，90/10，85/15，80/20 继续进行梯度洗脱，每次洗脱为2个柱体积的洗脱液，收集二氯甲烷/甲醇v/v 85/15洗脱的组分，得到奥兰丁。