[发明专利]一种基于数字PCR技术检测HER-2基因拷贝数变异的试剂盒及方法

摘要

本发明提供了一种基于数字PCR技术检测HER‑2基因拷贝数变异的试剂盒及方法。试剂盒包括：用于检测HER‑2基因的两组引物对和检测探针以及三个内参基因CEP17、EIF2C1和EFTUD2的引物对和检测探针、数字PCR预混液、荧光素酶、ddH₂O和校准文件。除此之外，本发明还提供了一种基于数字PCR技术检测HER‑2基因拷贝数变异的方法，可排除第17号染色体多体、非整倍体以及着丝粒扩增的现象，用于准确判定HER‑2基因扩增为阳性或者阴性的情况。

主权项

1.一种基于数字PCR技术检测HER‑2基因拷贝数变异的非诊断方法，其特征在于：提取待测样本的DNA作为模板，以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示引物作为扩增引物，并加入SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15所示检测探针、数字PCR预混液、荧光素酶和ddH₂O，进行数字PCR扩增，对扩增产物进行拷贝数统计并将HER‑2基因的拷贝数简写为H、CEP17基因的拷贝数简写为C、EIF2C1基因的拷贝数简写为EI、EFTUD2基因的拷贝数简写为EF，分别计算H/C、EF/EI、C/EF、H/EF的比值，若H/C≥2，则判定HER‑2扩增阳性；若H/C<2、当EF/EI≥2、C/EF≥2、H/EF≥2，则HER‑2扩增阳性；若H/C<2、当EF/EI≥2、C/EF≥2、H/EF<2，则HER‑2扩增阴性；若H/C<2、当EF/EI≥2、C/EF<2，则HER‑2扩增阴性；若H/C<2、当EF/EI<2、C/EF≥2、H/EF≥2，则HER‑2扩增阳性；若H/C<2、当EF/EI<2、C/EF≥2、H/EF<2，则HER‑2扩增阴性；若H/C<2、当EF/EI<2，C/EF<2，则HER‑2扩增阴性。