[发明专利]一种检测肉类制品成分的实时定量PCR方法

摘要

本发明公开一种检测肉类制品成分的实时定量PCR方法，包括以下步骤：提取肉类制品试样和标准样品的基因组DNA；根据线粒体NADH氧化还原酶1的多态性差异设计肉类制品试样和标准样品的基因组DNA所需的PCR扩增引物，并对应配制PCR反应体系进行PCR扩增，读取扩增过程中的Ct值；根据PCR扩增产物中的NADH氧化还原酶1的Ct值与18S rRNA的Ct值的比较，判断PCR扩增的可靠性；根据肉类制品试样与标准样品的基因组DNA扩增产物的NADH氧化还原酶1的Ct值的差值ΔCt比较，判断肉类制品试样中是否含有该待检测成分。本发明可同时检测肉类制品中具有不同物种来源的成分中的一种或多种，检测结果准确、可靠。

主权项

1.一种检测肉类制品成分的实时定量PCR方法，其特征在于，包括如下步骤：S10、分别提取肉类制品试样的第一基因组DNA、以及与肉类制品试样的物种来源对应的标准样品的第二基因组DNA；S20、针对所述肉类制品试样中的预设检测成分，设计所述第一基因组DNA和第二基因组DNA中的线粒体NADH氧化还原酶1基因进行PCR扩增所需的特异性引物序列，针对所述第一基因组DNA和第二基因组DNA中的基因18S rRNA，设计所述基因18S rRNA进行PCR扩增所需的18S rRNA引物序列，将所述第一基因组DNA与所述特异性引物、18S rRNA引物配制成第一PCR反应体系，将所述第二基因组DNA与所述特异性引物、18S rRNA引物配制成第二PCR反应体系；S30、对所述第一PCR反应体系和第二PCR反应体系分别进行实时定量PCR扩增，对应获得第一PCR扩增产物和第二PCR扩增产物，分别读取所述第一PCR扩增产物中的NADH氧化还原酶1的Ct值和18S rRNA的Ct值、以及所述第二PCR扩增产物中的NADH氧化还原酶1的Ct值和18S rRNA的Ct值；S40、当所述第一PCR扩增产物与所述第二扩增产物的NADH氧化还原酶1的Ct值的差值小于或等于2.0，并且所述第一扩增产物与所述第二扩增产物的18S rRNA的Ct值的差值小于或等于1.0时，判定为对应获得PCR扩增产物所进行的实时定量PCR扩增反应正常；S50、在判定获得所述第一PCR扩增产物所进行的实时定量PCR扩增反应、以及获得所述第二PCR扩增产物所进行的实时定量PCR扩增反应均正常时，计算所述第一PCR扩增产物与所述第二PCR扩增产物的NADH氧化还原酶1的Ct值的差值ΔCt，当ΔCt大于6.5时，判定呈阴性，即所述肉类制品试样中不含有所述预设检测成分；当ΔCt小于6.5时，判定呈阳性，即所述肉类制品试样中含有所述预设检测成分。