[发明专利]一种利用蓝藻合成丙烯酸的方法在审
| 申请号： | 201810665117.X | 申请日： | 2018-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN108728474A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 蒿飞;朱文博;陈贤情;夏文豪;杨月;王筱;王文;杨慧;江会峰 | 申请（专利权）人： | 嘉兴欣贝莱生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12P7/40;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙) 11548 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 314000 浙江省嘉兴市南湖区昌盛*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用蓝藻合成丙烯酸的方法，步骤如下：1)首先，基于蓝藻Syn7942的NSI基因构建整合载体NSI，重组得到载体NSI‑ceaS2；2)将重组载体NSI‑ceaS2转化至蓝藻Syn7942细胞内，然后通过氯霉素固体培养基初步筛选出单克隆转基因蓝藻Syn7942；3)将筛选出的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接至带有氯霉素抗性的液体培养基中，待蓝藻生长出后，提取蓝藻基因组，进行目的基因的PCR验证；4)将验证成功的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接至液体培养基培养，待蓝藻长到OD730大于或等于1时，添加IPTG诱导基因ceaS2的表达，该酶将以蓝藻光合作用产生的三磷酸甘油醛(G3P)或磷酸二羟基丙酮(DHAP)为底物，催化合成丙烯酸；5)分离提纯。本发明以蓝藻为底盘生物进行改造合成丙烯酸，生产原料仅需阳光和水分等，生产设备和生产环境构建简单，不需要大量用电，因此相较于其它生产方法，生产成本大幅度降低。 | ||
| 搜索关键词： | 蓝藻 合成丙烯酸 转基因蓝藻 液体培养基 转接 光合作用 氯霉素 三磷酸甘油醛 丙烯酸 二羟基丙酮 固体培养基 氯霉素抗性 初步筛选 催化合成 分离提纯 基因构建 蓝藻生长 目的基因 生产环境 生产设备 生产原料 验证成功 整合载体 重组载体 基因组 底盘 磷酸 底物 构建 生产成本 筛选 细胞 基因 转化 改造 生产 | ||
【主权项】：
1.一种利用蓝藻合成丙烯酸的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：1)首先，基于蓝藻Syn7942的NSI基因构建整合载体NSI，再根据蓝藻Syn7942细胞密码子偏好性优化基因ceaS2的密码子，然后将此基因插入到载体NSI上，得到重组载体NSI‑ceaS2；2)基于蓝藻Syn7942在自然状态下能够吸收外源基因的特性，将重组载体NSI‑ceaS2转化至蓝藻Syn7942细胞内，然后通过氯霉素固体培养基初步筛选出单克隆转基因蓝藻Syn7942；3)将筛选出的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接至带有氯霉素抗性的液体培养基中，待蓝藻生长出后，提取蓝藻基因组，进行目的基因的PCR验证；4)将验证成功的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接至液体培养基，在一定条件下培养，待蓝藻长到OD730大于或等于1时，添加IPTG诱导基因ceaS2的表达，表达的酶以蓝藻光合作用产生的三磷酸甘油醛或磷酸二羟基丙酮为底物为底物合成丙烯酸；5)对产物丙烯酸进行分离提纯。
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