[发明专利]一种利用蓝藻合成塔格糖的方法在审
| 申请号： | 201810665124.X | 申请日： | 2018-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN108728475A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 蒿飞;朱文博;陈贤情;夏文豪;杨月;王筱;王文;杨慧;江会峰 | 申请（专利权）人： | 嘉兴欣贝莱生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12P19/02;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙) 11548 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 314000 浙江省嘉兴市南湖区昌盛*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用蓝藻来生产塔格糖的方法，步骤：1)首先根据蓝藻Syn7942的NSI基因构建整合载体NSI，然后将HXK、FbaA以及phytase三个基因插入到载体NSI上，得到需要的重组载体NSI‑HFP；2)将载体NSI‑HFP转化至蓝藻Syn7942细胞内，然后通过氯霉素固体培养基初步筛选出单克隆转基因蓝藻Syn7942；3)将筛选出的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接带有氯霉素抗性的液体培养基，提取蓝藻基因组，进行目的基因的PCR验证；4)单克隆转基因蓝藻Syn7942在合适条件下培养，添加IPTG诱导基因HXK、FbaA以及phytase的表达，这些酶将以蓝藻光合作用产生的果糖为底物合成塔格糖；5)分离提纯。本发明以蓝藻为底盘生物进行改造合成塔格糖，生产原料仅需阳光和水分等，生产设备和生产环境构建简单，生产成本大幅度降低。 | ||
| 搜索关键词： | 蓝藻 转基因蓝藻 合成塔 光合作用 氯霉素 固体培养基 氯霉素抗性 液体培养基 初步筛选 分离提纯 合适条件 基因插入 基因构建 目的基因 生产环境 生产设备 生产原料 整合载体 重组载体 转接 基因组 生产塔 底盘 底物 构建 果糖 生产成本 筛选 细胞 基因 转化 改造 | ||
【主权项】：
1.一种利用蓝藻合成塔格糖的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：1)首先，基于蓝藻Syn7942的NSI基因构建整合载体NSI，再根据蓝藻Syn7942细胞密码子偏好性优化基因HXK、FbaA以及phytase的密码子，然后将三个基因插入到载体NSI上，得到重组载体NSI‑HFP；2)基于蓝藻Syn7942在自然状态下能够吸收外源基因的特性，将重组载体NSI‑HFP转化至蓝藻Syn7942细胞内，然后通过氯霉素固体培养基初步筛选出单克隆转基因蓝藻Syn7942；3)将筛选出的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接至带有氯霉素抗性的液体培养基中，待蓝藻生长出后，提取蓝藻基因组，进行目的基因的PCR验证；4)将验证成功的单克隆转基因蓝藻Syn7942转接至液体培养基，在一定条件下培养，待蓝藻长到OD730大于或等于1时，添加IPTG诱导基因HXK、FbaA以及phytase的表达，表达的酶以蓝藻光合作用产生的果糖为底物合成塔格糖；5)对产物塔格糖进行分离提纯。
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