[发明专利]一种酿酒酵母发酵生产D-塔格糖的方法在审
| 申请号： | 201810666464.4 | 申请日： | 2018-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN108774636A | 公开（公告）日： | 2018-11-09 |
| 发明（设计）人： | 夏文豪;陈贤情;蒿飞;杨月;王筱;王文 | 申请（专利权）人： | 嘉兴欣贝莱生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/61;C12P19/02;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙) 11548 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 314000 浙江省嘉兴市南湖区昌盛*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种酿酒酵母发酵生产D‑塔格糖的方法，步骤如下：将根据酿酒酵母密码子偏好性优化基因GalE的密码子构建在酿酒酵母表达载体YCplac33上，得到载体1，所述表达载体YCplac33上带有大肠杆菌的氨苄霉素抗性基因和酿酒酵母的筛选标记URA3基因；将上述重组的载体1转入野生型酿酒酵母W303中，根据酿酒酵母的筛选标记URA3，筛选阳性单克隆，再将阳性单克隆培养后提取该酵母基因组，进一步通过PCR验证，得到最终的发酵菌株；在一定条件下培养，待菌体长到一定浓度后；添加相应的底物果糖，35‑36℃，220‑250rpm反应5天，收集产生的D‑塔格糖，对产物塔格糖进行分离提纯。本工艺仅在生产的最后步骤有分离纯化工序，产品纯化工艺简单。 | ||
| 搜索关键词： | 酿酒酵母 阳性单克隆 筛选标记 塔格糖 发酵 氨苄霉素抗性基因 密码子偏好性优化 酿酒酵母表达载体 酵母基因组 大肠杆菌 表达载体 产品纯化 发酵菌株 分离纯化 分离提纯 产物塔 后提取 密码子 野生型 底物 构建 果糖 菌体 生产 转入 筛选 基因 | ||
【主权项】：
1.一种酿酒酵母发酵生产D‑塔格糖的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：1)将根据酿酒酵母密码子偏好性优化基因GalE的密码子构建在酿酒酵母表达载体YCplac33上，得到载体1，所述表达载体YCplac33上带有大肠杆菌的氨苄霉素抗性基因和酿酒酵母的筛选标记URA3基因；2)将上述重组的载体1转入野生型酿酒酵母W303中，根据酿酒酵母的筛选标记URA3，筛选阳性单克隆，再将阳性单克隆培养后提取该酵母基因组，进一步通过PCR验证，得到最终的发酵菌株；3)将验证成功的单阳性单克隆菌株转接至液体培养基，在一定条件下培养；4)添加相应的底物果糖，35‑36℃，220‑250rpm反应5天，收集产生的D‑塔格糖，对产物塔格糖进行分离提纯。
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