[发明专利]一种从平卧菊三七中提取绿原酸和异绿原酸的方法

摘要

本发明公开一种从平卧菊三七中提取绿原酸和异绿原酸的方法，其包括以下步骤：将新鲜平卧菊三七叶烘干、粉碎，得到粉料；粉料与乙醇溶液混合，采用超声波提取得到提取液，然后离心、过滤、浓缩得浑浊的深绿色浓缩液；浓缩液中加入澄清剂进行澄清；澄清的浓缩液中加入改性二氧化硅微球进行脱色，浓缩液的颜色由深绿色变成淡青色；淡青色浓缩液中加入无水乙醇进行除糖；除糖后的回收液经中高压色谱柱吸附；吸附完全后，分级解吸，浓缩、干燥后得到绿原酸成品干粉和异绿原酸混合物。本发明工艺简单，操作方便，成本低，无有害溶剂，产物纯度高，且纯化、除杂效果更好，节能环保，生产安全性高，适合工业化生产具有良好的市场前景。

主权项

1.一种从平卧菊三七中提取绿原酸和异绿原酸的方法，其特征是：其包括以下步骤：步骤1、原料预处理：将新鲜平卧菊三七叶放入热风干燥箱中烘干至含水量为14～18%，再进行粉碎，过60～80目筛，得到平卧菊三七叶粉料；步骤2、提取：将步骤1得到的平卧菊三七叶粉料与体积浓度50～60%乙醇溶液按质量比1：12～15混合，调节溶液pH值为2.5～3.0，采用超声波提取得到提取液，然后离心分离，得上清液，将上清液浓缩至原体积的1/5～1/3，得浑浊的深绿色浓缩液；步骤3、澄清：向步骤2得到的浓缩液中加入澄清剂，澄清剂用量为干燥后平卧菊三七叶粉料质量的0.5～1.0%，静置2～4h，离心，得澄清的浓缩液；步骤4、脱色：向步骤3得到的澄清浓缩液中加入改性二氧化硅微球，在温度为35～40℃ 的条件下脱色1～2h，改性二氧化硅微球用量为干燥后平卧菊三七叶粉料质量的0.3～0.6%，浓缩液的颜色由深绿色变成淡青色；上述的改性二氧化硅微球的制备方法，其包括以下步骤：（a）、将粒径为1～2μm的微米级二氧化硅微球在100～130℃下真空干燥3～5h，再采用质量分数10～30%碱性溶液进行活化处理，然后用纯水冲洗至中性；其中，碱性溶液为三乙胺、氢氧化钠、氢氧化钾、氢化钠或叔丁醇钾；（b）、步骤a中洗至中性后的溶液与氯代乙酸乙酯在体积浓度50～70%乙醇溶液中混合搅拌2～3h，继续加入乙二胺，室温下反应5～6h，反应结束后将溶液离心收集产物，再用干燥的二氯甲烷多次洗涤收集后的产物，常温真空干燥过夜，即可得到改性二氧化硅微球；所述的微米级二氧化硅微球、碱性溶液、氯代乙酸乙酯、乙二胺用量比例为：3～8g：0.5～1g：2～6mL：2～6mL；步骤5、除糖：向步骤4得到的浓缩液中加入无水乙醇，浓缩液与无水乙醇体积比为1：1～1.5，静置3～4小时，用200～300目纱布过滤，回收乙醇后得到回收液；步骤6、上柱吸附：步骤5得到的回收液先用盐酸调节pH值为 2～3，然后溶液经中高压色谱柱吸附，中高压色谱柱使用的填料为HPD600大孔树脂；步骤7、分级解吸：吸附完全后，先用蒸馏水对中高压色谱柱进行洗涤，洗至无色后，先用体积浓度30～40%乙醇溶液进行洗脱，使HPD600大孔树脂中的绿原酸被乙醇溶解而获得绿原酸洗脱液，再用体积浓度60～80%乙醇溶液进行洗脱，使HPD600大孔树脂中的异绿原酸被乙醇溶解而获得异绿原酸洗脱液；对含有乙醇的绿原酸洗脱液进行乙醇回收、减压浓缩、冷冻干燥后，得到绿原酸成品干粉，HPLC跟踪监测纯度，绿原酸纯度为38.5～42.3%；步骤8、异绿原酸混合物制备：对含有乙醇的异绿原酸洗脱液进行乙醇回收后，用体积浓度30%甲醇水溶液溶解，采用葡聚糖凝胶Sephadex LH‑20色谱柱进行色谱分离，再依次采用体积浓度30～40%、50～70%甲醇梯度洗脱，TLC薄层色谱跟踪检测；合并体积浓度50～70%甲醇梯度洗脱液，减压浓缩后，得到异绿原酸混合物成品，HPLC检测纯度，异绿原酸混合物纯度为92.5～94.6%。