[发明专利]一种地龙蛋白微球纳米创伤复合物的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种地龙蛋白微球纳米创伤复合物的制备方法及应用，包括地龙蛋白的制备、纳米碳球的制备、过渡系金属纳米中空微球的制备、地龙蛋白微球纳米创伤复合物的制备。与现有技术相比，本发明将蛋白以物理方式内嵌入过渡系金属纳米中空微球中，从而制备出具有缓释，诱导和多位点效应的医用药物制剂，以达到促创伤修复的目的。

主权项

1.一种地龙蛋白微球纳米创伤复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、地龙蛋白的制备：将鲜活地龙用生理盐水清洗三次，除去体表泥沙与污物，剪碎后用压力破碎的方式获得细胞破碎浆，向细胞破碎浆中加入生理缓冲液在4℃进行低速离心5分钟，除去体内泥沙与消化物后得到细胞破损混合物；在离心管内配制含Tris‑HCl缓冲液的10％～70％梯度蔗糖溶液，轻置细胞破损混合物于上述蔗糖溶液上端，于2500rpm离心，分别收集离心管内的上层组分、中层组分、下层组分，而后针对中层组分通过常规离子交换法和凝胶色谱法制备地龙蛋白混合物；S2、纳米碳球的制备：称取40g蔗糖溶解在100ml去离子水中，超声搅拌过夜，然后加热至200℃使其全部碳化，用去例子水和乙醇/丙酮混合液反复冲洗，除去碳中杂质，然后超声分散72小时，得到纳米炭球，备用；S3、过渡系金属纳米中空微球的制备，具体包括：S31、称取0.5mol过渡系金属盐MXn，其中M为过渡系金属，加入到已经超声分散好的纳米炭球中，在乙醇/水混合液中继续超声分散72小时，然后除去溶液，添加新的乙醇/水混合溶液继续超声分散72小时；S32、然后向S31中加入1g氯化铵继续超声分散1小时，然后在150℃下加热12小时，自然冷却后过滤得到沉淀，用乙醇/水混合液将沉淀冲洗3次后在40℃低温烘干得到烘干产物；S33、将S32制得的烘干产物以0.5℃/min的升温速率升至700℃，维持5小时，然后以1℃/min的速率开始降温至50℃后于室温冷却，即得到过渡系金属纳米中空微球；S4、地龙蛋白微球纳米创伤复合物的制备：称取1g过渡系金属纳米中空微球，加入2mg/ml的由地龙蛋白混合物与溶剂PBS混合而成的地龙蛋白混合液，4℃下搅拌24小时，离心除去上清液，沉淀部分即为制备好的地龙蛋白微球纳米创伤复合物，于4℃保存。