[发明专利]一种检测猪尿中β2受体兴奋剂的表面等离子体共振免疫方法

摘要

本发明公开了一种利用表面等离子体共振(SPR)免疫方法检测猪尿中β2受体兴奋剂，包括苯乙醇胺A、盐酸克伦特罗，其技术特点在于将牛血清白蛋白(BSA)偶联的相应半抗原包被到纳米金传感芯片表面，根据免疫原理，通过竞争抑制法结合SPR技术实现对猪尿中两种β2受体兴奋剂的定量检测。该方法具有高灵敏度，高准确性的特点，可以实现免标记，实时动态检测。为猪尿中β2受体兴奋剂的检测提供了新方法。

主权项

1.一种利用表面等离子共振免疫方法定量检测猪尿中的β2受体兴奋剂，包括苯乙醇胺A和盐酸克伦特罗，其特征包括以下步骤：/nS1、芯片的包被：在2片纳米金生物芯片上分别滴加1mg/mL～2mg/mL的苯乙醇胺A-BSA溶液，1mg/mL～2mg/mL盐酸克伦特罗-BSA溶液，37℃孵育1h，用去离子水冲洗，氮气吹干；滴加脱脂奶粉进行封闭，37℃孵育1h，用去离子水冲洗，氮气吹干，制备成苯乙醇胺A检测芯片、盐酸克伦特罗检测芯片，备用；/nS2、样品前处理方法：取空白猪尿在室温、5000×g条件下离心10min，取上清液；/nS3、标准品溶液的配制：分别准确称取苯乙醇胺A、盐酸克伦特罗，先用终体积10％的乙腈溶解样品，再加0.01M终体积90％的PBS溶解配制成1mg/mL的标准储备液，由1mg/mL的标准储备液加0.01M PBS逐级稀释得到不同梯度标准溶液；/nS4、表面等离子共振方法检测；/n(1)苯乙醇胺A的检测：将2.0ng/mL，25ng/mL，50ng/mL，100ng/mL的苯乙醇胺A的标准溶液与等体积的抗体溶液混合，37℃孵育0.5h，备用，使苯乙醇胺A的终浓度为1.0ng/mL，12.5ng/mL，25ng/mL，50ng/mL。将包被好的芯片装入SPR生化分析仪流通槽，通入0.01M PBS作为仪器运行缓冲液，将苯乙醇胺A的标准溶液与抗体的混合液通入流通池中进行竞争免疫结合反应，记录仪器的响应值(RU)，将标准品样品浓度与所对应的仪器响应值(RU)做标准曲线，获得浓度与RU的线性方程。/n(2)盐酸克伦特罗的检测：将0ng/mL，0.64ng/mL，1.3ng/mL，2.5ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL的盐酸克伦特罗的标准溶液与等体积的抗体溶液混合，37℃孵育0.5h，备用，使盐酸克伦特罗的终浓度为0ng/mL，0.32ng/mL，0.63ng/mL，1.25ng/mL，2.5ng/mL，5ng/mL，10ng/mL。将包被好的芯片装入SPR生化分析仪流通槽，通入0.01M PBS作为仪器运行缓冲液，将盐酸克伦特罗标准溶液与抗体的混合液通入流通池中进行竞争免疫结合反应，记录仪器的响应值(RU)，将标准品样品浓度与所对应的仪器响应值(RU)做标准曲线，获得浓度与RU的线性方程。/nS5、再生：用再生液洗脱芯片表面结合的抗体，实现芯片再生，用0.01M PBS冲洗至基线稳定，进行下一次测定/nS6、定量检测猪尿中的β2受体兴奋剂：/n分别将一定量苯乙醇胺A、盐酸克伦特罗添加到猪尿中，按照步骤S2的方法进行样品前处理，按照步骤S4的方法对实际样品进行检测，记录仪器响应值(RU)，通过步骤S4所得到的线性方程，换算出猪尿样品中的实际浓度，实现对猪尿中的β2受体兴奋剂的定量检测。/n