[发明专利]一种抗旱中华猕猴桃种质的诱导方法

摘要

本发明涉及一种组织培养技术，具体为一种抗旱中华猕猴桃种质的诱导方法，本研究以黄肉中华猕猴桃Hort 16A后代优良单株SWFU 02外植体材料进行研究，建立快速繁殖体系，同时使用秋水仙碱诱变处理中华猕猴桃SWFU 02的组织。对诱变后的中华猕猴桃SWFU 02施加PEG‑6000进行抗旱筛选，获得抗旱黄肉中华猕猴桃抗旱种质，为进一步在大田生产中推广抗旱优质中华猕猴桃打下基础。

主权项

1.抗旱中华猕猴桃种质的诱导方法，其特征在于该方法包括以下步骤：获取外植体：采摘健康且生长旺盛无病无虫害的中华猕猴桃SWFU02的叶片作为外植体，置于流水下冲洗后进行消毒灭菌；将消毒后的外植体用无菌水充分的漂洗；愈伤组织诱导及分化：基础培养基使用MS培养基，并添加蔗糖30g/L和琼脂4.5g/L，将pH值调整至5.8‑6.0之间，光照强度设置为3200lx，每天光照时间15h，培养温度设置为25度，添加诱导剂培养20天，将产生的愈伤组织材料接入上述培养基，并添加激素培养30天；诱导生根：基础培养基使用1/2 MS培养基，其中加入蔗糖15g/L和琼脂4.5g/L，将pH值调整至5.8‑6.0之间，光照强度设置为3200lx，每天光照时间15h，培养温度设置为25度，添加生根剂培养30天；炼苗：将长势旺盛生根正常的组培苗放置在室温条件下，将组培瓶的瓶盖打开并掩住，经过10天炼苗之后，将小苗取出移栽到基质中，移栽基质为进口泥炭：炉灰：珍珠岩的比例为2:1:1，将其拌匀后使用，保持温度在26±3℃，湿度控制在80%以上，用多菌灵进行灌根处理；多倍体诱导：采用秋水仙碱对中华猕猴桃SWFU 02带有愈伤组织的叶片进行多倍体诱导，光照培养40天；嵌合体分离：通过外部形态筛选出疑似多倍体的植株或者疑似多倍化的部位，将疑似变异的部位剥离下来和疑似变异的植株继续鉴定和分离6‑8代直到变异性状稳定不分离，将疑似变异植株转入生根培养基中诱导不定根，鉴定筛选出纯合四倍体植株；将鉴定出的四倍体纯合植株作为母株进行扩繁得到稳定的四倍体猕猴桃组培苗；PEG抗旱处理：将组培苗放入超净工作台中灭菌40分钟以上，放入超净工作台中灭菌40分钟以上，把浓度为70g/L的聚乙二醇（PEG）注入温度60℃左右还未凝固的生根培养基中并混匀，光照强度设置为3200lx，每天光照时间光照15h，温度设置为（25±3）℃；十四天后转入正常的生根培养基中，20天后可复绿的，即为抗旱中华猕猴桃种质。