[发明专利]一种单细胞测序筛选淋巴管内皮细胞标记分子的方法在审
| 申请号： | 201810691765.2 | 申请日： | 2018-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN109576356A | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 赵永祥;薛志刚;阳诺;钟莉娉 | 申请（专利权）人： | 广西医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 韦肖燕 |
| 地址： | 530001 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用单细胞测序筛选淋巴管内皮细胞标记分子的方法，包括以下步骤：（1）提取肿瘤淋巴管内皮细胞；（2）分离单细胞并进行裂解；（3）对样品的mRNA进行逆转录得到cDNA；（4）以cDNA为模板进行PCR扩增，产物纯化，进行Tagmentation反应，完成cDNA测序文库构建；（5）对构建的cDNA文库进行高通量测序；（6）测序结果进行生物信息学分析，寻找肿瘤淋巴管内皮细胞特异性的标记分子。 | ||
| 搜索关键词： | 标记分子 测序 淋巴管内皮细胞 肿瘤淋巴管 内皮细胞 构建 生物信息学分析 筛选 高通量测序 测序文库 产物纯化 逆转录 裂解 | ||
【主权项】：
1.一种单细胞测序筛选淋巴管内皮细胞标记分子的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）提取肿瘤淋巴管内皮细胞；2）分离单细胞并进行裂解：分离单细胞，加入裂解缓冲液中进行裂解，得到细胞裂解液；3）对样品的mRNA进行逆转录得到cDNA：使用美国ThermoFisher公司的SuperScript试剂盒构建逆转录体系，对上述步骤2）获得的细胞裂解液进行逆转录，得到cDNA；4）以cDNA为模板进行PCR扩增，构建测序文库，进行测序：使用美国Illumina公司的NexteraXT试剂盒，对上述步骤3）得到的逆转录产物进行扩增和纯化，构建高通量测序文库；完成后将文库送交测序；5）对测序结果进行生物信息学分析，寻找肿瘤淋巴管内皮细胞特异性的标记分子。
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