[发明专利]一种缩短琼脂糖凝胶电泳染色的方法

摘要

本发明涉及一种缩短琼脂糖凝胶电泳染色的方法，属于生物化学实验技术领域，包括安装凝胶盘、琼脂糖凝胶的制备、灌胶、加样、观察等步骤，使用新型核酸染色GelRed试剂(Biotium)，取消EB染色步骤，操作简便易掌握、实验结果条带清晰，实验过程试剂无毒、低致突变性，提高了胶带染色效果和时间效率，同时保证操作人员的健康和实验环境的安全性。

主权项

1.一种缩短琼脂糖凝胶电泳染色的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1安装凝胶盘，包括：a.将量筒、三角瓶、凝胶盘以及齿试样格洗净并晾干；b.将凝胶盘开口的两侧用胶带纸密封；c.将凝胶盘置于水平桌面上，并插上齿试样格；步骤2琼脂糖凝胶的制备，包括配置新鲜5×TBE电泳缓冲液母液：称取54g Tris碱和27.5g硼酸，再量取20mL已配置的0.5M EDTA溶液，最后用去离子水定容至1000mL，待用；配置6×凝胶加样缓冲液：分别称取25mg溴酚蓝、25mg二甲苯青FF和4g蔗糖，最后用去离子水定容至10mL，待用；用量筒量取5×TBE电泳缓冲液40mL加水至200mL，配制1×TBE稀释缓冲液并倒入三角瓶中；称取1g‑4g Invitrogen琼脂糖粉末，倒入三角瓶中，配成0.5％‑2％浓度琼脂糖胶液，盖上牛皮纸，轻轻摇晃三角瓶，使琼脂糖粉末散开；将三角瓶放入微波炉中，调整微波炉档位至中高火，设定时间1min；取出三角瓶，轻轻摇晃三角瓶，再次放入微波炉中，调整微波炉档位至中高火，设定时间为90s；取出三角瓶，轻轻摇晃三角瓶，直至有大气泡产生时停止，继续放入微波炉，直至琼脂糖完全溶解；步骤3灌胶，包括a.将磁力搅拌子放入三角瓶中，并将三角瓶置于装有冷水的容器中，放在磁力搅拌机上搅拌冷却；b.待三角瓶内的琼脂糖溶液温度冷却至50℃‑60℃，将琼脂糖溶液缓慢地倒入凝胶盘中，以免产生气泡；c.在每份10μL DNA样品PCR中加入5μL GelRed试剂与3×稀释凝胶加样缓冲液的混合液，放置待用；其中3×稀释凝胶加样缓冲液和GelRed染色液混合配比按3000～5000:1进行混合；d.将电泳槽置于水平桌面上，并调整至水平状态，加入2000mL的1×TBE稀释电泳缓冲液于电泳槽内；e.45‑60分钟待凝胶凝固后，撕开胶带密封纸，将凝胶盘转移到电泳槽中，拔出齿试样格，并将齿试样格洗净；步骤4加样，包括吸取3μL DNA样品PCR扩增产物、GelRed试剂和3×稀释凝胶加样缓冲液的混合液加入琼脂糖胶胶孔中，在待测样品左侧的样品孔中加入3μL的DNA分子量标记，用作分子量参照；步骤5电泳，包括盖上电泳槽的盖子，接上电源连接线，打开电泳仪的电源开关，将按钮调到“打开”状态以及“电压”模式，选择电压100V；将“电压”档调整至0V，再将按钮调到“关闭”的状态，并关闭电源开关；步骤6观察，包括a.打开电脑中的成像软件，接上凝胶成像系统的电源；b.戴上手套，将凝胶盘转移到紫外灯台上，取下手套，关闭成像系统的门；c.打开紫外灯的开关，选择成像软件“菜单”下的“预览”功能，调整曝光时间，单击“拍照”按钮，获取图像，并保存；d.关闭紫外灯的开关，断开凝胶成像系统的电源，打开成像系统的门；e.戴上手套，从凝胶盘中将凝胶取出，弃于垃圾袋中，用吸水纸将紫外灯搽拭干净，取下手套；f.关上成像系统的门，关闭电脑。